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寵物檢測熒光PCR技術(shù)的優(yōu)勢有哪些?

閱讀:1339      發(fā)布時間:2023-5-26
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  寵物檢測熒光PCR是一種基于DNA復(fù)制和擴增的技術(shù),其適用于檢測特定序列的DNA,并從中獲得更多或全部的DNA。PCR可以在短時間內(nèi)產(chǎn)生大量純的、具有特定序列的DNA分子,是現(xiàn)代分子生物學(xué)的基礎(chǔ)技術(shù)之一。而熒光PCR則是一種在傳統(tǒng)聚合酶鏈反應(yīng)的基礎(chǔ)上加入熒光探針以實現(xiàn)更準(zhǔn)確的檢測方法。
 
  原理是這樣的:先需要收集需要檢測的寵物樣本,如口腔拭子、血液或組織等樣本。然后需要使用熱解法將其中的DNA裂解,使其變?yōu)閱捂?。接著添加兩個特異性引物單元,即“前向引物”和“反向引物”,并加入熒光探針,該探針含有一個熒光染料和一個淬滅染料,可以與細(xì)胞外核酸(GC)結(jié)合。當(dāng)引物與模板相互作用時,在3'端區(qū)域上進行擴增,此時探頭發(fā)生水解,導(dǎo)致熒光染料從淬滅染料釋放,并且發(fā)生熒光信號釋放,以此來檢測PCR反應(yīng)產(chǎn)物。可以通過實驗室設(shè)備觀察PCR反應(yīng)體系中熒光信號變化的趨勢,即可對樣品DNA進行定量或定性分析。
 
  利用特定引物擴增所有目標(biāo)區(qū)域內(nèi)存在的DNA,引物的設(shè)計根據(jù)目標(biāo)序列的基本信息選擇合適的引物序列,使其在PCR過程中,能夠按照特定規(guī)則穩(wěn)定地結(jié)合到待擴增模板的特定位置上。與普通PCR不同,熒光PCR選用帶有熒光生物素標(biāo)簽的引物,可以將擴增的目標(biāo)串聯(lián)片段和引物結(jié)合成一個分子。通過Real-timePCR系統(tǒng)可以同時進行擴增反應(yīng)和融合曲線分析。這樣,在后期的熒光檢測過程中,就可以對所擴增目標(biāo)片段的數(shù)量進行準(zhǔn)確的定量。
 
  寵物檢測熒光PCR技術(shù)的其他優(yōu)勢還包括:
 
  高度靈敏性:可以從非常小的樣本量開始擴增,探測樣本中確定污染,擴增低拷貝的模版。
 
  高速度:相比傳統(tǒng)PCR技術(shù),不需要進行后續(xù)電泳與染色分析,可以在更短的時間內(nèi)完成檢測。
 
  高熱穩(wěn)定性引物和熒光探針被特意設(shè)計,確保了其在高溫下不會失活或降解。

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