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神經(jīng)生長(zhǎng)因子（NGF）的檢測(cè)
閱讀：1621 發(fā)布時(shí)間：2011-12-17根據(jù)神經(jīng)生長(zhǎng)因子（nervegrowthfactor，NGF）對(duì)神經(jīng)細(xì)胞的促增殖作用，可采用PCI2細(xì)胞分化試驗(yàn)檢測(cè)其活性。PCI2細(xì)胞是大鼠的嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞株，培養(yǎng)于含15％馬血清、5％FCS的RPMI-1640培養(yǎng)液中，在普通培養(yǎng)瓶中成團(tuán)懸浮生長(zhǎng)。將培養(yǎng)瓶包被鼠尾膠后，PCI2可貼壁生長(zhǎng)。
1．將PCI2置36％，7。5％C02條件下培養(yǎng)，每2天更換2／3培養(yǎng)液，待細(xì)胞接近匯合時(shí)，用含1mmol／L EGTA的上述培養(yǎng)液培養(yǎng)細(xì)胞6h或過(guò)夜，用RPMI-1640／水（1：1）洗滌細(xì)胞3次，吹打分離單個(gè)細(xì)胞，按1：4分瓶繼續(xù)培養(yǎng)。
2．用上述培養(yǎng)液將PCI2細(xì)胞配成106／mL，每個(gè)35mm培養(yǎng)皿中加入0．5mL細(xì)胞懸液和系列稀釋的NGF待測(cè)樣品或標(biāo)準(zhǔn)品，設(shè)不加NGF為對(duì)照。繼續(xù)培養(yǎng)20—24h。
3．在倒置相差顯微鏡下觀察PCI2細(xì)胞。細(xì)胞成簇生長(zhǎng)，計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞簇，其中細(xì)胞有纖維突起的細(xì)胞簇為陽(yáng)性細(xì)胞簇，減去不加NGF對(duì)照細(xì)胞孔中的陽(yáng)性細(xì)胞簇即為NGF誘導(dǎo)的分化細(xì)胞簇?cái)?shù)。以分化細(xì)胞簇?cái)?shù)對(duì)樣品稀釋度作圖，繪制劑量-反應(yīng)曲線，計(jì)算樣品中NGF的含量。