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抗體捕捉生物測定法檢測IL—12
閱讀：482 發布時間：2012-5-5IL-12由B細胞產生，由分子量分別為35kD和40kD兩個亞基通過二硫鍵連接而成，其功能為誘導T細胞、NK細胞產生IFN-7；增強T細胞、NK細胞的細胞毒作用，促進激活的T細胞、NK細胞增殖。
利用鼠抗人IL-12McAb（可自Roche公司購得）測IL-12濃度。
1．用包被緩沖液（pH9．5的碳酸鈉緩沖液）稀釋包被抗體為15ug／mL，在96孔酶標反應板，每孔加100rtl，室溫包被過夜。
2．洗滌后加封閉液（含1％BSA的磷酸鹽緩沖液）每孑L 2001uL，37℃1h。
3．在試管中稀釋IL-12標準品為1ng／mL，然后作5倍系列稀釋至8pe／mL（3管）。
4．待測樣品用*培養液作5倍系列稀釋3—5個稀釋度。
5．酶標板洗滌后，分別加各稀釋度Ibl2標準品及待檢標本，每孔100uL，每一標本設3復孔，加100~L*培養液，室溫孵育2．5—3ho
6．洗5次后，加PHA激活的人淋巴母細胞懸液（終濃度為2X104／mL）100uL／孔，C02溫箱培養24h。
7．加3H-TdR，以下步驟同IL-2測定。根據標準曲線計算IL-12水平。
8．注意事項 應盡量使待測樣品孔的3H-TdR摻人率位于標準曲線的陡峭部分，這樣所得結果才準確。此外，由于IL-12分泌細胞中有40kD多肽的過量表達，而40kD多肽無IL-12的生物活性，故并非所有的抗IL-12抗體均適用于本法。