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技術(shù)文章

特異性神經(jīng)元抗核抗體(Hu抗體)的檢測

閱讀:623          發(fā)布時間:2011-6-30

某些神經(jīng)系統(tǒng)綜合征是由于惡性腫瘤的遠隔影響所造成,稱為神經(jīng)系統(tǒng)副腫瘤綜合征(paraneoplasticsyndromesofthenervoussystem,PNSNS)。近年來由于發(fā)現(xiàn)了特異性的神經(jīng)元抗核抗體(Hu抗體),因而認(rèn)為此病與自身免疫有關(guān)。Hu抗體實質(zhì)上為多克隆IsC,能固定補體,可與中樞神經(jīng)系統(tǒng)及周圍神經(jīng)系統(tǒng)中所有神經(jīng)元胞核及小細胞肺癌細胞核起反應(yīng),但不與其他組織細胞(如腦膠質(zhì)細胞,肝、腎等組織細胞)發(fā)生反應(yīng),并與SLE等結(jié)締組織疾病所產(chǎn)生的非特異性抗核抗體有本質(zhì)上的差別,因此,稱為特異性神經(jīng)元抗核抗體(Hu抗體)。采用免疫熒光、ELISA法即可測出患者血清中Hu抗體。陳齊鳴等(1996)報道采用先進的親合免疫細胞組織化學(xué)ABC法和免疫印跡技術(shù)檢測PNSNS患者的Hu抗體,其敏感性和特異性顯著增高。現(xiàn)介紹親合免疫細胞組織化學(xué)ABC法檢測Hu抗體。

1.操作步驟
(1)6/1m正常人大腦額葉、顳葉、肝臟、腎臟及Wistar大鼠的大腦、小腦的冰凍切片干燥10min。
(2)丙酮固定10min后用含0.3%H202、1%BSA的PBS處理10min,抑制內(nèi)源性過氧化物酶。
(3)加10%羊血清/PBS封閉30min后,分別加稀釋的血清、腦脊液或尿液標(biāo)本在4℃冰箱過夜。
(4)PBS洗5min,更換3次,以下同。加適度稀釋的生物素標(biāo)記羊抗人IeC(第二抗體),37℃孵育15min。
(5)同上洗滌,加ABC復(fù)合物室溫作用15min。
(6)同上洗滌,DAB-H202底物顯色后,常規(guī)封片鏡檢。

2.結(jié)果顯示
(1)PNSNS患者的血清、腦脊液及尿液中的Hu抗體與正常人和Wistar大鼠所有神經(jīng)組織中的神經(jīng)元胞核形成均勻染色,核仁陰性,但不與神經(jīng)組織中的膠質(zhì)細胞、肝臟及腎臟組織細胞發(fā)生反應(yīng),說明該法具有高度特異性。
(2)血清及腦脊液中Hu抗體的滴度zui高可達1:64 000及1:4 000,尿液中Hu抗體滴度達到1:200,說明該法敏感性很高。
(3)以免疫印跡技術(shù)測得17例患者血清中的抗體識別神經(jīng)元胞核中蛋白抗原分子量為350-400kD。

3.臨床意義 通常認(rèn)為,IgC不能從腎小球濾過,尿中測出IgC型Hu抗體,可能是Hu抗體損害了腎小球,使其通透性增加所致。腦脊液Hu抗體滴度與血清中的抗體滴度無關(guān)聯(lián),提示可能有CNS中的局部合成。有76%(13/17)患者以PNSNS起病,并檢出Hu抗體,爾后發(fā)現(xiàn)原發(fā)灶,說明Hu抗體的測定對于部分癌腫,特別是小細胞肺癌的早期診斷有實際臨床意義。
 

 

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