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細(xì)胞免疫染色復(fù)染
閱讀:822 發(fā)布時(shí)間:2011-3-24 復(fù)染常有助于在細(xì)胞免疫染色中鑒別不同的細(xì)胞類型,或者亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)。這對(duì)組織切片來說是基本步驟,并可鑒定細(xì)胞的類型。也可用于其他染色反應(yīng)。復(fù)染不能使用熒光染料,因其復(fù)染后可產(chǎn)生自發(fā)熒光。為了選擇一種適宜的復(fù)染方法,首先應(yīng)檢測(cè)細(xì)胞染色試劑是否在乙醇中可溶。
1.不溶于乙醇的方法
(1)用水輕輕洗滌標(biāo)本片;
(2)加數(shù)滴Harris蘇木精(商品化試劑)于標(biāo)本中,孵育約5min。染色時(shí)間的長短決定染色的強(qiáng)度;
(3)用水輕輕洗滌;
(4)用0.5%冰乙酸/99.5%乙醇處理標(biāo)本片大約10rain;
(5)用水輕輕洗滌;
(6)用DPX封片。
2.溶于乙醇的方法
(1)用水輕輕洗滌標(biāo)本片;
(2)加數(shù)滴Mayer蘇木精(商品化試劑)至標(biāo)本片,孵育大約5min,染色時(shí)間的長短決定染色的強(qiáng)度;
(3)用水輕輕洗滌;
(4)用30mm01/L氫氧化銨重復(fù)處理標(biāo)本片
(5)用水輕輕洗滌;
(6)用Gelvat01或MOWi。1封片。
復(fù)染 | 推薦用法 | 需準(zhǔn)備試齊 | 優(yōu) 點(diǎn) | 缺 點(diǎn) |
蘇木精 | 可用于黑色或棕色染料;用于核或細(xì)胞質(zhì)抗原染色 | 可購買 | 可保存的信息量大;核大 | 染色很暗,不適合弱抗原信號(hào)的顯示 |
甲基綠 | 可用黑色或棕色染色,用于核抗原染色 | 貯存液二1%甲基綠溶于100mmol/L 酸鈉(pH5.5);工作液為0.1% | 染色淺,適用于弱抗原信號(hào),胞質(zhì)大 | 獲得的組織或細(xì)胞精細(xì)資料有限 |
堅(jiān)固紅 | 用于藍(lán)色染色或LacZ檢測(cè),可用于核或細(xì)胞質(zhì)抗原染色 | 可購買 | | 著色很淺,獲得的組織或細(xì)胞精細(xì)資料有限 |