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檢測大腸桿菌的PCR技術
閱讀:796 發布時間:2011-1-19 中美學者合作,對3.3kb的DNA探針進行了序列分析,發現其編碼EHEC溶血素AB基因,此基因與已發表的泌尿道大腸桿菌等的溶血素在DNA序列和氨基酸序列有所不同,是EHEC*的,并以此為基礎,發展了PCR檢測方法。此法特異、敏感、快速,可在3—4h左右出結果。
Brian等針對VT基因A亞單位分別設計出SLTl引物和SLT2引物和雜交用的寡核苷酸探針。兩對引物可同時擴增EHEC的SLTl和SLT2,先后擴增出370bp和283bp的產物,并用放射性探針予以證實,而非EHEC擴增為陰性。這種方法還可檢測小到一個細菌的基因組,并可用來檢測大便中的DNA而無需預先分離和培養細菌。
另外,Fratamico等還設計了一種多重PCR方法,即利用EHEC所*的eoe基因、SLTl和SLT2、60Mμ質粒的保守序列設計的多重引物,成功地同時擴增得到了1087bp(eaeA)、227bp和224bp(SLTl和SLT2)、166bp(質粒),這種多重PCR方法靈敏、特異和快速,可用來診斷產SLT的0157所致的疾病,也可對糞便標本的增菌培養物直接進行擴增,結果比傳統的SMAC漏檢率減少。Venkateswaran等還用復合PCR-簡單過濾技術檢測出牛肉中含有的腸出血性大腸桿菌0157;H7及其毒素。