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免疫濁度技術基本原理
閱讀：1044 發布時間：2011-1-8 免疫濁度技術是利用可溶性抗原、抗體在液相中特異結合，形成一定大小的抗原抗體復合物，使反應液出現濁度。當反應液中保持抗體過剩時，形成的復合物隨抗原量增加而增加，反應液的濁度亦隨之增加，與一系列的標準品對照，即可計算出樣品的含量。
免疫濁度分析的光學基礎是反應液中分散粒子對光的反射、折射、散射（衍射）和吸收等。粒子被光照射后而發光，這一現象主要取決于粒子的大小、入射光波長及粒徑與波長的比例關系等等。當入射光作用于粒子后向各個方向發射光，甚至可繞過粒子發射光線，稱散射或衍射光。但光照射到膠體溶液后，粒子的光學現象是復雜的，濁度法中檢測的光信號成分主要為散射光或透射光。
免疫濁度測定技術按照儀器設計的不同可以分為兩種，即透射比濁儀測定（turbidimete rmeasure）和散射比濁儀測定（nephelomete rmeasure）。比濁儀測定是測量由于反射、吸收或散射引起的入射光衰減，其讀數以吸光度A表示。A反映了入射光與透射光的比率（A＝2一lg10T，T代表濁度百分比）。散射比濁儀測定是測量入射光遇到質點（復合物）后呈一定角度散射的光量，該散射光經放大后以散射值表示。
透射光和散射光測定比較
Rayleigh、Debye和Mei等分別對光散射現象進行了系統研究，認為光散射強度10）與入射光強度（Iθ）的關系符合下述公式：
Iθ＝Io×8π4×N×α2（1＋COS2θ）／γ2×入2。
亦可表示如下：
Iθ＝Io ×（24π3／λ4）×N×γ2×[（n2-n02）／（n2+2n02）]×（1+COS2θ）。
式中入和I0分別表示入射光的波長和強度，θ表示光信號檢測器與入射光之間的夾角，Iθ表示與入射光束成θ角度處散射光的強度，r表示微粒分子至檢測器的距離，α表示分子極化率，N表示每單位容積分子數目，n和n。分別為粒子和溶劑的折射率。
在免疫化學反應中，可溶性抗原與抗體反應，形成免疫復合物，反應系統中的粒子由小變大，相應地也會出現散射光強度隨角度而變的情況。因此上述理論為免疫濁度法的研究、儀器和試劑的設計、實驗條件的優化及臨床應用奠定了理論基礎。