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RNA操作指南
閱讀：803 發布時間：2010-12-9RNA抽提純化是分子生物學研究的基本工作內容。但是由于RNA酶（RNase）的廣泛存在和難以滅活的特性，使RNA的抽提純化和后續工作十分困難。即使Trizol試劑和各類RNA抽提純化試劑盒的廣泛應用使RNA抽提和純化變得方便快捷，但是涉及RNA的工作仍然是分子生物學研究中zui讓人棘手的。為了保證您的工作成功，請仔細閱讀本操作指南，相信它能幫助您解決常見的問題。
總而言之，RNA工作順利與否的關鍵是防止RNA酶的污染。RNase無處不在，在實驗操作的任何一步，任何偶然的疏忽或不妥當的操作都有可能造成RNase的污染，從而導致整個實驗的失敗。因此，嚴格控制實驗條件，避免任何可能的污染，是保證實驗成功的先決條件。為此，必須作到以下幾點：
- 盡可能在實驗室專門辟出RNA操作區，離心機、移液器、試劑等均應。RNA操作區應保持清潔，并定期進行除菌。
- 操作過程中應始終戴一次性橡膠手套，并經常更換，以防止手、臂上的細菌和真菌以及人體自身分泌的RNase帶入各種容器內或污染用具。盡量避免使用一次性塑料手套。塑料手套不僅常常給操作帶來不便，而且塑料手套的多出部分常常將器具有RNase處傳遞到RNase-free處，擴大污染。
- 盡量使用一次性的塑料制品，避免共用器具如濾紙、tips、tubes等，以防交叉污染。例如，從事RNA探針工作的研究者經常使用RNase H、T1等，在操作過程中極有可能造成移液器、離心機等的污染。而這些污染了的器具是RNA操作的大敵。
- 配制溶液用的乙醇、異丙醇、Tris等應采用未開封的新瓶裝試劑。
- 關于一次性塑料制品，建議使用廠家供應的出廠前已經滅菌的tips和tubes等。多數廠家供應的無菌塑料制品很少有RNase污染，買來后可直接用于RNA操作。用DEPC等處理的塑料制品，往往由于二次污染而帶有RNase，從而導致實驗失敗。
- 所有玻璃器具都必須在150℃烘烤4小時。
- 如果您需要長期儲藏或運輸RNA樣品，請將您的RNA樣品溶解在Sangon提供的RNApro中，它可以在常溫下保證您的RNA樣品在一年內不會發生降解。
無法用DEPC處理的用具可用氯仿擦拭若干次，這樣通常可以消除RNase的活性。