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產品簡介

產品簡介： 本核蛋白提取試劑盒提供了一種簡單、方便的從培養細胞或新鮮組織中抽提核蛋白的方法。整個過程只需約60分鐘就可以將核蛋白和漿蛋白從細胞中分離出來。得到的蛋白可以用于Western blot等實驗。本試劑盒通過漿蛋白抽提試劑使細胞膨脹破裂，釋放出胞漿蛋白，再通過離心得到細胞核。然后通過核蛋白抽提試劑抽提得到細胞核蛋白。本試劑盒可以抽提50/100個樣品（每個樣品約2×10⁶個Hela細胞或40mg組織）。

規格：50T/100T

產品內容：

保存：核/漿蛋白抽提試劑4℃保存，PMSF于-20 ℃保存。

操作方法：

裂解蛋白的所有步驟都需在冰上或4℃進行。

一、對于體外培養細胞：

1．根據用量取適當的漿蛋白抽提試劑和核蛋白抽提試劑加入PMSF，使PMSF的最終濃度為1mM。PMSF需現用現加，可以在兩種蛋白抽提液中加入DTT至終濃度0.5mM。

2．對于貼壁細胞，去除培養液，用PBS洗一遍，用細胞刮刀收集細胞，或用EDTA消化后吹打下細胞。500 g離心2～3分鐘收集細胞，吸盡上清留下沉淀備用。

3．對于懸浮細胞：用PBS洗一遍，500 g離心2～3分鐘收集細胞，吸盡上清，留下細胞沉淀備用。

4．每20μl細胞沉淀加入200μl漿蛋白抽提試劑（2×10⁶個細胞沉淀的體積約20μl或40mg）。

5．用移液器吹打或高速渦旋15秒（可適當延長），必須使細胞沉淀分散開成單細胞懸液。細胞沉淀分散不會導致蛋白產量降低。

6．冰浴10分鐘。

7．最高轉速劇烈渦旋10秒，4℃ 12000～16000g離心10分鐘。

8．上清即為抽提得到的細胞漿蛋白，立即吸取上清至預冷的樣品管中備用，進行后續的PAGE、Western等實驗，但蛋白濃度較低，可根據需要進行相應濃縮。

9．沉淀即為細胞核，要吸盡殘余的上清（避免細胞漿蛋白的污染），加入50-100μl核蛋白抽提試劑。

10．用移液器吹打或高速渦旋15秒（可適當延長）至沉淀分開，冰浴10分鐘。

11．最高轉速劇烈渦旋10秒，4℃12000～16000g離心10分鐘。12．立即吸取上清至預冷的樣品管中，此即為抽提得到的細胞核蛋白。可進行后續實驗或-70℃凍存。    對于組織樣品：    把組織稱重后，盡可能切成非常細小的碎片，按每50mg組織加入200μl-500μl PBS，用勻漿器冰上勻漿制成細胞懸液，500 g離心2～3分鐘收集細胞，吸盡上清，收集沉淀。加入200μl漿蛋白抽提試劑后接上述步驟5。

注意事項：

1．裂解得到的蛋白樣品，由于含有較高濃度的去垢劑干擾，不能用Bradford法測定蛋白濃度，可以選用本公司生產的BCA蛋白定量試劑盒(貨號PC0020)測定蛋白濃度。

2．對于組織樣品，本試劑盒適用于新鮮組織，對凍存組織抽提效果較差。

3．為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

備注：以上數據均來自公開文獻, Solarbio暫未進行獨立驗證, 僅供參考。These protocols are for reference only. Solarbio does not independently validate these methods.

公司簡介

上海索萊寶生物科技有限公司是一家集銷售生化試劑、實驗耗材、自產分子生物學產品為一體，并能提供的專業性生物科技公司。公司秉承“以客戶為中心，以產品為保障、以誠信為基礎、以創新為宗旨"的發展理念，在依靠客戶的大力支持和員工的不懈努力下獲得了快速的成長。公司織結構清晰，內部管理科學，擁有一支既分工細致又高度合作的年輕化隊伍，保持了各個部門之間的高效合作運轉，充分保障了公司在充滿競爭的市場中處于地位。公司注重與*合作，目前已與 Amersham、Amresco、Axygen、BD、Corning、Dragon、Eppendorf等企業結成緊密的合作伙伴關系，代理其世界的*產品，并在全國各地設有分銷機構。我們將以高度的責任感和出色的產品質量為客戶提供高品質的產品和實驗技術解決方案。豐富的經驗、優良的品質、充足的庫存、準確的交貨時間、競爭力的價格，所有這些都保證了我們向您提供的是專業的服務！立足北京，上海，*，隨著產品營銷戰略的不斷延伸，我們將逐步發展成為*的專業性生物科技公司。我們希望能夠和尊敬的客戶一起，利用各自的資源優勢和勇于進取的敬業精神，為中國生命科學研究的發展作出更多的貢獻。為了更好、更全面的發展，現公司正在誠招各地代商和招聘若干銷售、研發人員，歡迎垂詢并期待您的加入！

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