目錄:上海索寶生物科技有限公司>>生化試劑>>實驗室自產產品>> PC0010-100TBradford法蛋白濃度測定試劑盒
| 供貨周期 | 一周 | 規格 | 100T |
|---|---|---|---|
| 貨號 | PC0010-100T | 應用領域 | 環保,化工,農林牧漁,能源,綜合 |
| 主要用途 | 科研 |
產品簡介
| 英文名稱 | Bradford Protein Assay Kit |
| 儲存條件 | BSA附件-20℃，其它試劑4℃ |
| 有效期 | 1年 |
| 規格 | 100T（2500微孔） |
| 單位 | 盒 |
bradford蛋白定量試劑盒產品內容：
組成 | 包裝（2500微孔) | 保存 |
5×G250染色液 | 100ml | 2-8℃ |
PBS稀釋液 | 30ml | 2-8℃ |
蛋白標準(5mg/ml BSA) | 1ml | -20℃ |
產品簡介：
考馬斯亮蘭G-250染料，在酸性溶液中與蛋白質結合，使染料的最大吸收峰的位置（Imax），由465nm變為595nm，在一定的濃度范圍內，測定的吸光度值A595與蛋白質濃度成正比。Bradford法測定蛋白濃度不受絕大部分樣品中的化學物質的影響，樣品中巰基乙醇的濃度可高達1M，二硫蘇糖醇的濃度可高達5mM，但受略高濃度的去垢劑影響，需確保SDS的濃度低于0.1%，Triton X-100低于0.1%，Tween 20, 60, 80低于0.06%。含去垢劑的樣品推薦使用索萊寶生產的BCA蛋白濃度測定試劑盒。
操作說明：
一．微孔酶標儀法 1. 溶解蛋白標準品，取10ul，稀釋至250ul ，使終濃度為0.2mg/ml。待測蛋白樣品在什么溶液中，標準品也宜用什么溶液稀釋。但是為了簡便起見，也可以用0.9%NaCl或PBS稀釋標準品。 2. 5×G250染色液使用前請顛倒3-5次混勻，取1ml 5×G250染色液，加入4ml雙蒸水，混勻成1×G250染色液，此1×G250染色液可在4℃保存一周。 3. 將標準品按0,2,4,6,8,12,16,20微升分別加到96孔板中，加PBS稀釋液補足到20微升。 4. 將樣品作適當稀釋（最好多做幾個梯度，如作2倍、4倍、8倍稀釋），加20微升到96孔板的樣品孔中。由于移液器在取小量時的誤差，標準線前面的點可能不很準確，所以盡可能的讓樣品點落在標準線1/2后。 5. 各孔加入200微升稀釋后的1×G250染色液，室溫放置3-5分鐘。 6. 用酶標儀測定A595，或560-610nm之間的其它波長的吸光度。 7. 根據標準曲線計算出樣品中的蛋白濃度。 二．分光光度計法 如無酶標儀，染色反應可在離心管中進行，反應液混勻后加入比色皿中，使用分光光度計測定吸光值。步驟如下： 1. 取八支（或者更多）干凈的10ml離心管，標記上號。 2. 取100ulBSA加入PBS 2.4ml稀釋至終濃度為0.2mg/ml。 3. 5×G250染色液使用前請顛倒3-5次混勻，取10ml 5×G250染色液，加入40ml雙蒸水，混勻成1×G250染色液，此1×G250染色液可在4℃保存一周。
4. 按下表加入試劑(以每孔5ml計，多余的用來清洗比色皿)
離心管號 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7（樣品管1） | 8（樣品管2） | 9（樣品管3） |
標準蛋白BSA | 0ul | 100ul | 200ul | 300ul | 400ul | 500ul | 500ul適當稀釋的樣品1 | 500ul適當稀釋的樣品2 | …… |
PBS | 500ul | 400ul | 300ul | 200ul | 100ul | 0ul | 0ul | 0ul | 0ul |
1XG250染色液 | 5ml | 5ml | 5ml | 5ml | 5ml | 5ml | 5ml | 5ml | 5ml |
5. 反應3分鐘后測OD值。為了實驗的準確性，可每間隔2分鐘加一管染色液，每間隔2分鐘測一管OD值。如下表：
離心管號 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | …… |
加染色液（分鐘） | 0 | 2 | 4 | 6 | 8 | 10 | 12 | 14 | …… |
測OD值 | 3 | 5 | 7 | 9 | 11 | 13 | 15 | 17 | …… |
此圖為伯樂酶標儀680，單波長，570nm測得。室溫反應三分鐘
備注：以上數據均來自公開文獻, Solarbio暫未進行獨立驗證, 僅供參考。These protocols are for reference only. Solarbio does not independently validate these methods.
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