国产一级a毛一级a看免费视频,久久久久久国产一级AV片,免费一级做a爰片久久毛片潮,国产精品女人精品久久久天天,99久久久无码国产精品免费了

      
      

      您好, 歡迎來到化工儀器網(wǎng)

      | 注冊(cè)| 產(chǎn)品展廳| 收藏該商鋪

      17801761073

      technology

      首頁   >>   技術(shù)文章   >>   基因組DNA提取試劑盒簡介 solarbio

      上海索寶生物科技有限公司

      立即詢價(jià)

      您提交后,專屬客服將第一時(shí)間為您服務(wù)

      基因組DNA提取試劑盒簡介 solarbio

      閱讀:12120      發(fā)布時(shí)間:2010-10-24
      分享:

       

      基因組DNA提取試劑盒簡介
       
      DNA是遺傳信息的載體,是重要的生物信息分子,是分子生物學(xué)研究的主要對(duì)象,為了進(jìn)行測序、雜交、基因表達(dá)、文庫構(gòu)建等試驗(yàn),獲得高分子量和高純度的基因組DNA是非常重要的前提,因此基因組DNA的提取也是分子生物學(xué)試驗(yàn)技術(shù)中重要、基本的操作之一。
      Solarbio公司提供各種不同樣品基因組DNA提取試劑盒,如植物、動(dòng)物、細(xì)菌、細(xì)胞、血液、酵母等基因組DNA提取試劑盒。所提取的基因組純度高,片段大小在50kb左右。用戶可根據(jù)需要選用不同的試劑盒來進(jìn)行不同樣品的抽提。

      一、基因組DNA提取的原則
      1、保證核酸一級(jí)結(jié)構(gòu)的完整性(因?yàn)檫z傳信息全部儲(chǔ)存在核酸一級(jí)結(jié)構(gòu)中,故完整的一級(jí)結(jié)構(gòu)是保證核酸結(jié)構(gòu)與功能研究的基層)。
       
      2、排除其它分子(如蛋白質(zhì)、多糖,、脂類、有機(jī)溶劑等)的污染,使下游試驗(yàn)順利進(jìn)行。
       
      二、基因組DNA提取的原理和方法
      DNA與組蛋白構(gòu)成核小體,核小體纏繞成中空的螺旋管狀結(jié)構(gòu),即染色絲,染色絲再與許多非組蛋白形成染色體。染色體存在于細(xì)胞核中,外有核膜及胞膜。從組織中提取DNA必須先將組織分散成單個(gè)細(xì)胞,然后破碎胞膜及核膜,使染色體釋放出來,同時(shí)去除與DNA結(jié)合的組蛋白及非組蛋白。
       
      1、樣品預(yù)處理
      從各種不同來源的樣品(如細(xì)菌、酵母、血液、動(dòng)植物組織細(xì)胞等)中提取高純度的基因組DNA,因細(xì)胞結(jié)構(gòu)及所成分不同,樣品預(yù)處理方式也不同,以下簡單介紹常用提取材料的預(yù)處理方式,若需詳細(xì)了解,請(qǐng)參考本公司各基因組DNA提取試劑盒說明書。
       
      部分樣品預(yù)處理方式

      植物材料
      液氮研磨
      動(dòng)物材料
      勻漿、液氮研磨
      培養(yǎng)細(xì)胞
      蛋白酶K處理
      細(xì)菌
      溶菌酶破壁
      酵母
      破壁酶破壁、玻璃珠研磨
      血液
      紅細(xì)胞裂解液去紅細(xì)胞

       
       
      2、細(xì)胞裂解
      CTAB法:
      適用于植物組織、真菌等。
      CTAB是一種陽離子去污劑,可溶解細(xì)胞膜,并與核酸形成復(fù)合物。該復(fù)合物在高鹽溶液中(>0.7M NaCl)是可溶的,通過有機(jī)溶劑抽提,去除蛋白、多糖、多酚等雜質(zhì)后加入乙醇沉淀即可使核酸分離出來。
       
      SDS法:
      適用于細(xì)菌、血液、酵母、動(dòng)物組織、細(xì)胞等。
      SDS是一種陰離子去污劑,可溶解細(xì)胞膜,裂解細(xì)胞,使蛋白質(zhì)變性、染色體解析。
       
      其它裂解方法:
      物理方式:機(jī)械剪切、超聲波破碎、研磨勻漿等
      化學(xué)方式:異硫氰酸胍、堿裂解等
      酶法:蛋白酶K
       
      3DNA分離純化
      純化要求:
      核酸樣品中不應(yīng)存在對(duì)酶(如核酸內(nèi)切酶、DNA聚合酶等)有抑制作用的成分。
      其它生物大分子如蛋白質(zhì)、多糖、多酚和脂類分子等污染應(yīng)降低到低程度。
      排除其它核酸分子的污染,如提DNA時(shí)應(yīng)去除RNA,反之亦然。
       
      純化方法:
      細(xì)胞破碎后,常使用吸附材料結(jié)合方法去除雜質(zhì)和純化DNA,主要有硅基質(zhì)材料、陰離子交換樹脂和磁珠等。因硅基質(zhì)材料可特異吸附核酸DNA,使用方便、快捷,不需要使用有毒溶劑如酚、氯仿等,使得提取基因組像過濾一樣簡單,因此硅基質(zhì)材料成為大規(guī)模分離純化DNA的通用方法。
       
      硅基質(zhì)材料吸附核酸的原理:主要利用DNA在高鹽低pH值環(huán)境下與硅基質(zhì)材料相結(jié)合,在低鹽高pH值環(huán)境下與硅基質(zhì)材料脫離的特征。其機(jī)理可能是高濃度鹽離子破壞了硅基質(zhì)水分子結(jié)構(gòu),形成陽離子橋,當(dāng)鹽被清除后,再水化的硅石破壞了基質(zhì)和DNA之間的吸引力,因而DNA從硅基質(zhì)上被洗脫下來。
       
      注意事項(xiàng):
      盡量簡化操作步驟,縮短提取過程,以減少各種有害因素對(duì)核酸的破壞。
       
      減少化學(xué)物質(zhì)對(duì)DNA的降解,為避免過酸、過堿對(duì)DNA雙鏈中磷酸二酯鍵的破壞,操作多在pH4.0-10.0的條件下進(jìn)行。
       
      防止基因組DNA的生物降解,主要是DNase降解基因組DNADNase需二價(jià)金屬陽離子如Mg2+等的激活,可用EDTA等金屬離子螯和劑螯和Mg2+以抑制DNase的活性。
       
      減少物理因素對(duì)DNA的降解,物理降解因素主要包括機(jī)械剪切力(如劇烈振蕩、攪拌等),細(xì)胞突然置于低滲液中導(dǎo)致的細(xì)胞爆炸式破裂,DNase大量釋放,樣品反復(fù)凍融和高溫等。
       
      4DNA洗脫收集
      DNA的洗脫效率取決于以下重要因素:
      洗脫液成分:
      采用硅基質(zhì)膜吸附的DNA,可將DNA在低鹽高pH值條件下洗脫下來。pH值在7.0-8.5之間洗脫效率較高,pH值低于7.0則洗脫效率很低。一般基因組提取試劑盒中的洗脫緩沖液就是TEpH8.0),既為DNA從硅基質(zhì)膜上洗脫下來提供良好的pH環(huán)境,其中的EDTA又能保證DNA不被DNase降解,同時(shí)由于EDTA濃度非常低,對(duì)核酸內(nèi)切酶、DNA聚合酶的影響非常微弱,不影響后續(xù)試驗(yàn),可放心使用。
       
      洗脫液體積:
      當(dāng)洗脫液體積小于30ul時(shí),洗脫效率很低且不穩(wěn)定;當(dāng)洗脫液體積在50-200ul時(shí),洗脫效率穩(wěn)定在80-90﹪,并可保證得到大產(chǎn)量,因此洗脫液體積不能小于30ul
       
      加洗脫液部位:
      100-200ul洗脫液能*覆蓋硅基質(zhì)膜,DNA的洗脫量可得到保證,但當(dāng)洗脫液體積較少如30-50ul時(shí),須在硅基質(zhì)膜中間部分懸空滴加洗脫液,以確保少量的洗脫液能*覆蓋硅膠膜。
       
      洗脫液的溫度:                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                      
      在加洗脫液之前,先將洗脫液在60-75℃水浴中預(yù)熱10分鐘,可有效提高DNA的洗脫效率。
       
      洗脫時(shí)間和次數(shù):
      加入預(yù)熱的洗脫液后,可在室溫放置2-5分鐘使DNA*溶解在洗脫液里通過離心而洗脫下來。同時(shí)可進(jìn)行二次或三次洗脫,即將前次洗脫下來的洗脫液再上柱、離心,使前次沒有洗脫下來的DNA再次溶解在洗脫液里,從而提高DNA的產(chǎn)量。
       
      5DNA的定量及檢測
      提取得到的DNA片段需從分子質(zhì)量、濃度、純度等方面進(jìn)行檢測,從而判斷DNA質(zhì)量。
      用瓊脂糖凝膠電泳分析DNA分子質(zhì)量:
      得到的基因組DNA片段的大小與樣品保存時(shí)間、操作過程中的剪切力等因素有關(guān)。Solarbio公司的基因組DNA提取試劑盒提取的不同材料基因組DNA片段大小一般在50kb左右,能很好地滿足后續(xù)試驗(yàn)的要求。
       
      通常用瓊脂糖凝膠電泳分析DNA分子質(zhì)量時(shí),以溴酚藍(lán)為示蹤染料,EB染色,紫外觀察,并與DNA分子量標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照即可判斷所提DNA的平均分子量。高質(zhì)量的基因組DNA應(yīng)顯示為單一條帶,如DNA降解則表現(xiàn)為彌散條帶。
       
      用紫外分光光度計(jì)檢測DNA濃度和純度:
      濃度測定:
      DNAOD260處有顯著吸收峰,OD260值為1相當(dāng)于大約50ug/ml雙鏈DNA
      以下簡單介紹OD260的測定方法:
      所提基因組DNA樣品=100ul
      進(jìn)行OD260值測定的待測樣品=20ul所提基因組DNA樣品+180ul TE=200ul
      DNA稀釋倍數(shù)=200ul/20ul=10
      200ul待測樣品OD260=0.2
      待測樣品濃度100ul基因組DNA樣品濃度)=50ug/ml×OD260×稀釋倍數(shù)=100 ug/ml
      所提100ul基因組DNA樣品總量=100 ug/ml×100ul=10ug DNA
      純度測定:
      一般用OD260/OD280值檢測DNA樣品的純度。正常OD260/OD280值約為1.7-1.9,說明DNA純度較好;若OD260/OD280值小于1.7,說明可能有蛋白污染;若OD260/OD280值大于2.0,說明可能有RNA污染或DNA已經(jīng)降解。
      注:因?yàn)?/span>pH值和離子會(huì)影響光吸收值,因此洗脫時(shí)如不使用洗脫緩沖液,而使用去離子水,OD260/OD280值會(huì)偏低,但并不表示純度低。
       
      6DNA的儲(chǔ)存
      儲(chǔ)存溶液:
      DNA為兩性解離分子,在堿性條件下較穩(wěn)定,因此一般用TEpH8.0)保存。TE的成分為:10 mM Tris-HCl(Tris與鹽酸形成強(qiáng)的緩沖對(duì)1 mM EDTA(乙二胺四乙酸,能螯合二價(jià)金屬陽離子,抑制DNase的活性);pH8.0(堿性條件可減少DNA的脫氨作用,防止降解)。ddH2O的正常pH值為7.0,可作為DNA的儲(chǔ)存液,但有些試驗(yàn)室制備的ddH2O呈酸性(pH值小于7.0),這不僅影響DNA的洗脫效率,而且導(dǎo)致長時(shí)間保存的DNA容易發(fā)生降解。因此建議用TE作為DNA的長期儲(chǔ)存液。
      儲(chǔ)存條件:
      為避免DNA降解,提取的DNA應(yīng)*行分裝,然后置于-20-70℃保存,同時(shí)注意避免反復(fù)凍融造DNA降解。

      會(huì)員登錄

      請(qǐng)輸入賬號(hào)

      請(qǐng)輸入密碼

      =

      請(qǐng)輸驗(yàn)證碼

      收藏該商鋪

      標(biāo)簽:
      保存成功

      (空格分隔,最多3個(gè),單個(gè)標(biāo)簽最多10個(gè)字符)

      常用:

      提示

      您的留言已提交成功!我們將在第一時(shí)間回復(fù)您~
      在線留言
      主站蜘蛛池模板: 周口市| 新沂市| 嘉善县| 广河县| 太保市| 定南县| 临夏市| 乌什县| 花垣县| 时尚| 大英县| 陆河县| 安国市| 荔波县| 津南区| 康乐县| 调兵山市| 泸定县| 林州市| 南丰县| 梁河县| 遵义县| 航空| 中宁县| 新乡市| 颍上县| 朝阳市| 克东县| 通化市| 乌拉特中旗| 柳州市| 赣州市| 和龙市| 济源市| 德庆县| 从江县| 宁乡县| 阳朔县| 荣昌县| 尼勒克县| 和林格尔县|