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尿液中對硝基酚的檢測——HPLC法
對硝基酚是接觸硝基苯及含對硝基苯基化合物作業工人體內的主要代謝產物。尿中對硝基酚濃度的測定，被認為是生物學監測和職業病診斷的重要指標。尿中對硝基酚的測定方法有比色法、氣相色譜法及液相色譜法等。比色法操作煩瑣、靈敏度差；氣相色譜法雖然靈敏度高、選擇性好，但是需要將對硝基酚衍生、操作復雜、不適于大批樣品分析；近年來開展環境樣品和尿液樣品中對硝基酚檢測主要使用HPLC方法，但是由于尿液中雜質干擾多，導致凈化不好，干擾多，需要增加凈化步驟。
方法優勢：
迪馬科技開發的《尿液中對硝基酚的檢測》，采用固相萃取-液相色譜法測定人尿中的對硝基酚，以濃鹽酸作為提取液，采用ProElut PXL 和ProElut Al-N固相萃取柱凈化樣品，通過HPLC檢測；方法定量限是0.1 mg/kg。本方案前處理步驟簡單、凈化效果好，基質效應小且檢測時間短；準確度高，重現性好。
以下為詳細解決方案，敬請參考！
尿液中對硝基酚的檢測——HPLC法
1、適用范圍
本方案適用于尿液中對硝基酚的檢測，本方法定量限0.1 mg/kg。
2、提取
取10 g樣品，加入2 mL濃鹽酸，沸水浴60 min，冷卻至室溫；
加入25 mL乙酸乙酯振蕩2 min，6000 rpm離心2 min；
取出上清液在40 ℃水浴條件下，減壓蒸至近干，再加入3 mL 50%甲醇水混勻，待凈化。
3、凈化—— ProElut Al-N 1 g/6 mL （Cat#：65306）上層
ProElut PXL 3 mL（Cat#：65920）下層
a活 化： | 加入5 mL甲醇、5 mL 50%甲醇水，流出液棄去； |
b上 樣： | 將待凈化液加入小柱，流出液棄去； |
c淋 洗： | 加入5 mL 50%甲醇水淋洗小柱，流出液棄去，棄去上層小柱，再用3 mL 50%甲醇水淋洗下層小柱，流出液棄去； |
d洗 脫： | 加入3 mL甲醇，收集洗脫液； |
e重新溶解： | 將洗脫液在40 ℃下減壓蒸至近干，1 mL水溶解殘渣，過微孔濾膜供HPLC分析。 |
4、色譜條件
色譜柱：Diamonsil C18（2），250 mm × 4.6 mm，5 μm（Cat#：99603）
流 速：1.0 mL/min 進樣量：20 μL 柱 溫：30 ℃
檢測器：UV 360 nm
流動相： A：0.1%甲酸水 B：甲醇 A：B=60：40
5、添加回收結果
人尿中對硝基酚的HPLC檢測添加回收結果
分析物 | 添加水平(mg/kg) | 回收率(%) |
對硝基酚 | 0.1 | 82.30 |
0.5 | 81.69 |
對硝基酚標準品(1.0 mg/L)液相色譜圖
對硝基酚標準品(5.0 mg/L)液相色譜圖
添加水平為0.1 mg/kg人尿中對硝基酚檢測的液相色譜圖
添加水平為0.5 mg/kg人尿中對硝基酚檢測的液相色譜圖
人尿中對硝基酚檢測(空白樣品)的液相色譜圖
尿液中對硝基酚的檢測——HPLC法相關產品信息：
貨號 | 名稱 | 規格 |
樣品前處理 | ||
65306 | ProElut AL-N | 1 g/6 mL 30/pk |
65920 | ProElut PXL | 3mL 50/pk |
244358 | 12管防交叉污染真空SPE萃取裝置 | 12位 |
4803 | 1,3,6mL柱管通用連接器 | 15/pk |
4806 | 考克(控制流量) | 15/pk |
99011 | 真空/正壓兩用泵，無油 | 1/pk |
99013 | 抽濾瓶套裝 (包括硅橡膠管2米,2L抽濾瓶及橡膠塞) | 1/pk |
30039 | FitMax針頭式過濾器 Nylon | 13 mm,0.22 μm 100/pk |
30040 | FitMax針頭式過濾器 Nylon | 13 mm,0.45 μm 100/pk |
標準品 | ||
12-N-10855-5G | 對硝基酚[100-02-7] | 5 g |
色譜柱及保護柱 | ||
99603 | Diamonsil C18(2) 通用型反相色譜柱 | 250 × 4.6 mm，5 μm |
6201 | EasyGuard C18 保護柱 | 10 × 4.0 mm 1/pk 2個柱芯+1個柱套 |
HPLC溶劑?緩沖鹽?離子對試劑 | ||
50102 | 甲醇 HPLC級 | 4 L |
50104 | 乙酸乙酯 HPLC級 | 4 L |
50144 | 甲酸 HPLC級 | 50 mL |
通用色譜產品 | ||
52401B | 瓶架/藍色（現貨） | 50孔 |
52401A | 瓶架/白色（現貨） | 50孔 |
1034 | 樣品瓶（棕色/螺紋） | 2 mL, 100/pk |
1035 | 樣品瓶蓋/含墊（已經組裝） | 100/pk |
H80465 | HPLC 進樣針 | 25 μL |
紅色產品貨號#30039、#30040、#1034、#1035*