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促紅細胞生成素酶免檢測試劑盒
(德國IBL NM56011)
預期用途
促紅細胞生成素(EPO)酶免檢測試劑盒用于人血清中EPO的定量檢測,用于體外診斷,還可輔助貧血癥和紅血球增多癥的診斷。隨著重組EPO的出現,它可作為生物治療增加紅細胞數量,那么EPO試驗就可用于輔助貧血癥病人的預測和用藥過程的觀察。
簡介
EPO是分子量為30000-340000道爾頓的糖蛋白,人EPO是由165個氨基酸組成的多肽,包含有一個O-連接和3個N-連接的糖鏈。重組EPO在免疫試驗中是天然蛋白的良好替代品。血清中的EPO水平由蛋白的生成率和清除率決定,90%的EPO由成人腎臟的腎小管細胞產生,組織氧化中會降低。現象表明,這些細胞中用于檢測血氧飽和度的蛋白是一種血紅素基團,隨著血漿中的氧分壓的降低,EPO濃度會增加,這也提示我們在正常的細胞內,血清中EPO濃度與紅細胞量呈負相關關系。
血清中EPO濃度的定量檢測可輔助貧血或紅細胞增多癥的診斷。再生障礙性貧血,溶血性貧血和貧血都是由于缺鐵導致海拔血清EPO。而繼發性貧血患者體內的EPO水平是由于腎功能衰竭和其他疾病如獲得性免疫缺陷綜合征(AIDS)引起,這就是zui有可能由于腎臟受損而引起的EPO大量產生的原因。低濃度的EPO可對腎移植排斥反應做出早期預警,還可以用于監測艾滋病人使用AZT的治療過程,EPO濃度的增加表明貧血與AZT治療相關聯是由于紅細胞發育不全或apliasia紅血球增多癥,或原發性紅細胞增多癥(紅細胞量增加)起因于紅細胞未受到刺激,因此,血紅蛋白的增加引起EPO的減少,導致血清中EPO水平降低。繼發性紅血球增多癥,也是總紅細胞數增加,循環EPO水平提高的生理反應,引起了組織缺氧,缺氧因素可能有肺纖維化,心血管疾病,長期暴露在高海拔地區,異常形式的血紅蛋白和藥物治療。一些腫瘤也會產生EPO,這種情況下,EPO可作為監測有效治療的腫瘤標記物。
實驗原理
促紅細胞生成素(EPO)酶免檢測試劑盒采用的是雙位點酶聯法,檢測具有生物活性的EPO氨基酸鏈,采用看兩種不同的鼠單抗與人EPO特異性結合。一個是生物標記的鼠單抗,另外一個是HRP標記鼠單抗。
試驗中,標準品,質控品或是樣品與酶標抗體和生物素標記抗體一起在鏈霉親和素包被的微孔板內孵育,孵育結束后,洗去未結合的成分,再加入TMB底物液孵育,終止液加入終止反應,顏色變為黃色。黃色強度與樣品中的EPO成正比,標準品的濃度和OD值繪制標準曲線,質控和樣本中的EPO濃度可直接從標準曲線上讀取。標準品已經WHO EPO標準認證,WHO參考標準品是EPO*標準(87/684)
注意事項
儲存和穩定性
應在2-8℃下運輸,避免高溫或陽光直射。樣品的貯存和穩定性以及試劑的準備都在相關章節有介紹。微孔板可保存至有效期,不用的微孔板要立即放置密封袋內保存在2-8℃。
樣品采集和貯存
血清
需用人血清進行,樣品雙份檢測。400ul血清是必要的,我們建議采樣時間在7:3到12:00am,因為有文獻報道稱人的EPO是會不斷變化的。無需加入抗凝劑采集全血,允許全血在2-8℃下凝結,報道稱,與放免試驗中在冰上凝集約30%相比,室溫下凝集會導致EPO值降低。不要將樣品放置在自動除霜冷凍機內,使用前,所有樣品應平衡至室溫,混合均勻,避免采用溶血或脂血樣品
貯存條件:2-8℃,24h
-15℃,12個月
避免高溫或是陽關直射,避免反復凍融
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