醛固酮ELISA試劑盒

時間：2011/11/8閱讀：1628

醛固酮ELISA試劑盒

德國IBL*，貨號：DB52001

德國IBL中國*代理商“深圳科潤達生物工程有限公司”竭誠為您服務

1、應用范圍

此ELISA試劑盒可用于人血清和尿液中醛固酮的定量檢測。注：僅供體外診斷用。

2、實驗原理

此ELISA試劑盒采用的是典型的競爭法。標準品、質控品和病人樣品中的未標記抗原和酶標抗原競爭結合包被板上有限的抗體結合位點。洗板以除去未結合的物質。洗板后，加入酶底物液。zui后加入終止液以終止酶反應，并在酶標儀上讀取OD值。包被孔中溶液所顯示的顏色與樣品中醛固酮的量成正比。實驗中所用的標準品可作一條標準曲線，我們可以直接從標準曲線上讀取樣品和質控品中醛固酮的量。

3、臨床應用

醛固酮是一種有效的鹽皮質激素，這種鹽皮質激素的合成和分泌都會受到體內腎素-血管緊張素系統的調控。醛固酮可促進腎遠曲小管對鈉的重吸收，從而可以保鈉排鉀，進而控制循環血溶量。醛固酮長期分泌過多會引起高血壓。血清醛固酮的檢測加上血漿腎素水平的檢測通常都用來區分原發性和續發性醛固酮增多癥。

分類	血清醛固酮	血漿腎素
原發性醛固酮增多癥	低	高
續發性醛固酮增多癥	高	高

醛固酮的檢測再加上選擇性抑制和刺激實驗，我們可以將原發性醛固酮增多癥分為兩種基本類型：

1）由腎上腺瘤（一個或兩個）引起的原發性醛固酮增多癥。

2）由腎上腺增生引起的原發性醛固酮增多癥。

這種分類對于疾病的治療與處理具有重要作用。腎上腺瘤一般對外科手反應良好，而腎上腺增生在醫學上更好處理。總得說來，用ELISA方法檢測血清醛固酮是高血壓鑒別診斷的一個重要輔助工具。

4、樣品的采集與儲存

血清：進行一次雙份檢測大概需要0.2ml血清。采集4-5ml血液到相應的標記試管中，并待其凝血，離心獲取血清。4℃下可穩定存放24個小時，如果實驗過幾天再做，可將樣品凍存-10℃的環境或更低溫度下。

尿液：進行一次雙份檢測大概需要0.2ml尿液。將24小時尿液收集到相應的樣品容器中。4℃理可穩定存放24小時，如果實驗過幾天再做，可將樣品凍存于-10℃或更低溫度的環境下。將所有的人樣品都當作潛在的生物有害物質，處理時應當特別小心。

5、樣品預處理

血清：此檢測系統是一直接檢測系統，不需要進行任何樣品預處理。

尿液：使用前用尿液稀釋液按1：50的比例稀釋尿液樣品。例如：用1ml尿液稀釋液稀釋20μl尿液樣品。

6、實驗所需器材但試劑盒不提供

1）移液器，50；100；150和300μl

2）取樣吸頭

3）蒸餾水或去離子水

4）搖床

5）酶標儀

6）尿液稀釋液（如果用尿液樣品做實驗，就得稀釋樣品），用于尿液樣品的稀釋。

7、試劑盒成份

1）兔抗醛固酮抗體包被的可拆包被板，即用。內含：抗醛固酮抗體包被的96孔包被板，密封于含干燥劑的包半裝袋中，儲存：冷藏于2-8℃的環境下，穩定性：12個月或標簽上的有效期。

2）HRP標記的醛固酮酶聯物，50倍濃縮型，內含：HRP標記的醛固酮酶聯物、蛋白緩沖液和無汞防腐劑，體積：300μl/支，儲存：冷藏于2-8℃的環境下，穩定性：12個月或標簽上的有效期，制備：使用前用檢測緩沖液按1：50的比例進行稀釋（例如：40μl HRP酶聯物中加入2ml檢測緩沖液。如果整個包被板都使用，可以用12ml檢測緩沖液稀釋240μl HRP酶聯物，棄去剩余試劑。

3）醛固酮標準品，即用。6支，內含：醛固酮、人血清白蛋白和無汞防腐劑，用血清和一定量的醛固酮制備而成。下表為標準品的大概濃度，具體濃度請見試劑瓶標簽：

標準品	濃度	體積/支
標準品 A	0 pg/ml	2.0 ml
標準品 B	15 pg/ml	0.6 ml
標準品 C	50 pg/ml	0.6 ml
標準品 D	200 pg/ml	0.6 ml
標準品 E	500 pg/ml	0.6 ml
標準品 F	1000 pg/ml	0.6 ml

儲存于2-8℃的環境下，穩定性：12個月或標簽上有效期，一旦打開，所有的標準品都必須在14天內用完或將其凍存，避免反復凍融。

4）質控品，即用，1支，內含：醛固酮、人血清白蛋白和無汞防腐劑，用緩沖液和一定量的醛固酮制備而成，具體濃度及可接受范圍請見試劑瓶標簽。體積：0.6ml/支，儲存：冷藏于2-8℃的環境下，穩定性：12個月或標簽上的有效期，一旦打開，所有的質控品都必須在14天內用完，必免反復凍融。

5）濃縮冼滌液，10倍濃縮型，1支，內含：緩沖液、非離子型去垢劑和無汞防腐劑，體積：50ml/支，儲存：冷藏于2-8℃的環境下，有效期：12個月或標簽上的有效期，制備：使用前用蒸餾水或去離子水按1：10的比例進行稀釋，如果整個包被板都使用，可用450ml蒸餾水稀釋50ml濃縮冼滌液。

6）檢測緩沖液，即用，1支，內含：蛋白緩沖液和無汞防腐劑，體積：15ml/支，穩定性：12個月或標簽上的有效期。

7）TMB底物液，即用，1支，內含：TMB、過氧化氫和非DMF或DMSO，體積：16ml/支，儲存：冷藏于2-8℃的環境下，穩定性：12個月或標簽上的有效期。

8）終止液，即用，1支，內含：1M的硫酸，體積：6ml/支，儲存：冷藏于2-8℃環境下，穩定性：12個月或標簽上的有效期。

8、實驗步驟

樣品預處理：

血清：無

尿液：使用前用尿液稀釋液按1：50的比例進行稀釋。

使用前必須將所有的試劑都平衡到室溫，標準品、質控品和樣品都必須作雙份檢測，一旦實驗開，所有的步驟都必須完整的進行下去。

1）制備好即用型的HRP酶聯物和檢測緩沖液。如果用尿液作實驗，應將尿液稀釋好。

2）取出所需數目的板條，將不用的板條重新密封于包裝袋中并冷藏。

3）將標準品、質控品和樣品（血清或已稀釋好的尿液）分別50μl加入到相應的微孔中（雙份檢測）

4）在每一微孔中加入100μl酶聯物（建議您使用多道移液器）。

5）室溫環境下，在包被板搖床上（200rpm）溫育1個小時。

6）每孔用300μl洗滌液洗板3次，并在吸水紙上拍干。

7）以相同的時間間隔，在每一微孔中加入150μl TMB底物液。

8）室溫環境下，在包被板搖床上溫育15-20分鐘。

9）在每一微孔中加入50μl終止液。

10）加終止液后20分鐘內450nm處讀取OD值。

*如果OD值超過450nm濾光片的檢測上限，我們可用405n或415nm代替，OD值可能會比較低，但它并不會影響樣品和質控品的實驗結果。

9、結果計算

1）計算兩個標準品OD值的平均值。

2）在半對數坐標紙上，以平均OD值為Y軸、標準品的濃度為X軸作一條校準曲線。如果使用免疫檢測軟件，我們可以作四參數曲線。

3）計算每一未知樣品OD值的平均值。

4）直接從標準曲線上讀取樣品的濃度。

5）將獲得的樣品濃度值乘以稀釋因子。然后乘以24小時尿液的體積，從而其閃單位可變為pg/24小時。zui后將pg/24小時除以10⁶，相應的單位就變成μg/24小時。

6）如果血清樣品濃度高于1000pg/ml,我們可以用標準品A將其進行稀釋（但稀釋比例不高于1：8）。則其結果應乘以相應的稀釋因子。如果尿液樣品的濃度高于1000pg/ml，我們可以用尿液稀釋液對其進行稀釋（但稀釋比例不能高于1：2），zui后其結果也應當乘以相應的稀釋因子。

轉換因子：

pg/ml×2.744＝pmol/L pmol/L=nmol/L×1000

10、參考值

正常血清參考值

對于所有的臨床檢驗來說，每個實驗室都應收集數據并建立自己的正常值范圍：

人群	范圍（pg/ml）
鹽攝入量未受限制，坐立采集樣品的人群	10-160
鹽攝入量未受限制，站立采集樣品的人群	40-310

正常尿液參考值

對于所有的臨床檢驗來說，每個實驗室都應收集數據并建立自己的正常值范圍：

人群	范圍（ug/24h）
鹽攝入量未受限制，坐立采集樣品的人群	5-19

本譯文僅供參考，詳情請以原文為準。

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