炎癥性腸病(IBD)是一組慢性非特異性腸道炎癥性疾病,糞便鈣衛蛋白(FC)在該病的管理中是較為理想的檢測標志物。但FC的檢測結果易受多種因素影響,僅在取樣過程中就存在諸多變異因素,其應用價值受到限制,因此如何規范FC的實驗室檢測是IBD診斷中重要的一環。
炎癥性腸病和糞便鈣衛蛋白
近年來,炎癥性腸病(IBD)在我國的發病率不斷升高,已經成為消化科較為常見的疾病。
炎癥性腸病主要包括克羅恩病(CD)和潰瘍性結腸炎(UC)兩種類型,臨床上以腹痛、腹瀉為主要消化道表現,以發熱、消瘦、貧血為主要全身性表現。這些非特異性表現與腸道易激綜合征極易混淆,而FC的檢測卻能很好的把兩種病人區分開,醫學研究者能通過 糞便鈣衛蛋白檢測的結果進行病情嚴重程度評估,從而減少不必要的腸鏡檢查。
鈣衛蛋白是 S100 蛋白家族中的一種鈣鋅結合蛋白,其存在于中性粒細胞胞漿中,當腸道炎癥通透性增加后會促進中性粒細胞向腸腔遷移,導致 糞便鈣衛蛋白水平增高。FC成分較為穩定,有較好的耐熱性,不易被細菌和各種酶類破壞。
在歐洲,克羅恩病以及結腸炎組織( ECCO) 以及世界胃腸病組織( WGO) 的共識指南中,糞便鈣衛蛋白被認為是一種較為理想的 IBD 無創性標志物。糞便鈣衛蛋白試劑盒對于IBD的診斷、活動性評估及療效監測具有較好的臨床價值,并具有試劑價廉、檢測無創、患者接受程度高和操作方便等多種優點,對于減少非必需的腸鏡檢查,更好的提升患者體驗具有重要的意義。
FC實驗室規范化操作指南
然而,糞便鈣衛蛋白檢測目前缺少有效的外部商用質控品,患者年齡、用藥及標本等因素也影響檢測的準確性,這為炎癥性腸病的鑒別帶來一定難度。FC檢測結果的有效性和可靠性與實驗規范密不可分,我們除了規范取樣流程,其它因素如患者年齡、用藥、腸道準備及血液影響等因素也應當規范化。
標本影響因素及注意事項
標本影響因素 | 注意事項 | |
標本留取 時間 | 同一患者同一天不同時間段所排出的糞便的FC含量之間也有較大差異,排便的次數與排便 間隔的長短也會對結果產生影響 | 清晨第 1 次排便的標本推薦作為檢測樣本 |
標本留取 方式 | 不規范的留樣卻很可能對檢測結果產生較大影響 | 用規范的留樣杯,在留樣過程中保持樣品清潔,避免水分蒸發或混入水份 |
標本采樣 及 萃取方式 | 糞便稱重采樣是采樣方式的“金標準",目前主流的商業化檢測試劑盒大多采用定量萃取管對糞便進行萃取,實際操作中糞便性狀多樣,單一萃取管萃取法,可能無法確保定量結果的準確性 | 如對于固態便以及糊狀便,可用萃取管直接進行采樣,而對于水樣便,則應使用移液槍定量加樣。 |
不同的試劑盒所采用的定量萃取管的結構、設計原理、精密度也不盡一致,使用不同萃取管也會造成 FC 結果變化。 | 使用與試劑盒同廠家的萃取系統,減少差異。對于非常異質樣的樣本,建議使用涂布器或者類似的設備進行手工均勻化 | |
標本采樣 位置 | 在同一標本的不同位置采樣,其 FC 檢測結果也會有較大差異。同一標本不同位點的 FC 檢測值之間差異最大可達 23%。 | 采樣時建議避開血液和黏液部分,在樣本頭、體、尾至少 3 個不同位置均勻取樣 |
標本存儲 的 時間和溫度 | FC 在室溫下的穩定時間尚未有一致結論,最短是 1 d,最長可以到 7 d。 | 對 FC 檢測建議新鮮標本盡快送檢 |
溫馨提示:考慮到糞便標本的變異因素較多,各種條件對檢測水平產生的影響還難以確定,在實際科研中應該進行連續多次檢測,以確保結果的可靠性和有效性。
▲標本影響因素及注意事項
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德國DRG出品的EIA-5415糞便鈣衛蛋白試劑盒,基于ELISA夾心法原理,可以用于定量檢測糞便樣品中的鈣衛蛋白。該試劑盒建議與制樣系統EIA-5674配套應用,以減少不同品牌萃取管差異引起的標本取樣差異,更接近良好的實驗效果。
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