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使用前標本準備:
冰凍切片標本可采用 (1) 新鮮組織,特點是快速,但未用完的包埋組織塊不能保存;(2) 使用經典方法10%甲醛或4%多聚甲醛室溫2~10分鐘固定過的組織,優點是既不影響后續步驟,包埋組織塊又可長期冰凍保存,隨時再用,缺點是步驟稍繁。(3) 培養細胞,800g離心10分鐘收集培養細胞,用吸頭或針頭撥出細胞沉淀塊,放入OCT包埋劑內。
應避免采用降低組織冰點的甲醇乙醇固定。本產品說明書不提供關于組織取材、滲透、固定、冰凍切片等技術信息。用戶應閱讀冰凍切片機操作手冊,參考各種常規技術方法。
使用方法:
1. OCT包埋:用水或PBS沖洗固定的組織塊,用吸水紙吸去液體。在盛標本的包埋模子內,擠出適量的包埋劑,放入組織和細胞沉淀塊,加包埋劑wanquan埋沒組織塊。可用2層鋁箔紙折疊成簡易的模子。如有氣泡可用針頭或吸頭吸出。
2. 冰凍:將盛有組織細胞和包埋劑的模子,正置于切片機冷室內冰凍10分鐘。此時,包埋劑為乳白色固體。包埋劑和組織冷凍時體積略有膨脹,因此模子應正置,由底部向頂部進行冰凍。也可將OCT包埋的組織置于干冰或液氮,或放入-40~-70 ºC冰箱冰凍固化保存,用前取出置于切片機冷室內平衡溫度(否則損壞刀)。
3.切片:可在切片機的組織卡盤(chuck)上加少許包埋劑并在其固化前嵌入組織塊,然后再于組織周圍加入少許包埋劑使其穩定。進行常規切片,厚度范圍2~100 µm。
4. 收片后,用適量水或PBS沖洗切片3次,每次2−3分鐘,洗除包埋劑。而后可進行常規組化染色、病理染色、原位雜交。未用完的組織塊可冷凍儲存。
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