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北京理加聯合科技有限公司

影響ASD光譜儀讀數不穩定的因素是什么

時間:2021-12-23 閱讀:858
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  ASD光譜儀是指通過測定物質的波長在光區范圍內光的吸收度,對物質進行定性和定量分析的儀器。由光源、單色器、樣品池、檢測器和記錄儀組成。光譜主要來源于分子振動,由于每種物質的結構不同,就會出現不同的吸收頻率,因此產生具有一定特征的光譜,由此可以進行定性、定量分析和結構剖析。由于光區的不同,光譜法分為近光譜、中光譜和遠光譜,其中分子振動的基頻主要位于中區。因此中區在定性與定量分析方面準確性更高。
 
  根據信號的采集方式光譜可分為透射光譜、反射光譜和光聲光譜,這些光譜都是吸收光譜,但具有不同的特點,如透射光譜多用于定性分析,很難用于定量分析,而反射光譜和光聲光譜均可以用于定性和定量分析。光譜法具有快速、樣品需要量少、測定方便和不破壞樣品等特點,因而在土壤學研究中具有廣泛應用,如土壤有機質和礦物的結構與組成。
 
  ASD光譜儀讀數不穩定可能是實驗者頭痛的問題。靈敏度越高的儀器,表現出的吸光值漂移越大。事實上,設計原理和工作原理,允許吸光值在一定范圍內變化,即ASD光譜儀有一定的準確度和精確度。
 
  1、核酸本身物化性質:溶解核酸的緩沖液的pH值、離子濃度等在測試時,離子濃度太高也會導致讀數漂移,因此建議使用pH值一定、離子濃度較低的緩沖液(如TE)可大大穩定讀數。核酸的吸光值受pH值和緩沖液離子濃度影響。只有在一定的pH值和低離子濃度的條件下(如10mMTris-HClpH8.0),才能得到精確的檢測結果。水的pH值不穩定,可能導致檢測誤差。一些緩沖液在紫外范圍內存在自身吸收,為了確保準確測量,請使用與懸浮或洗脫樣品時相同的緩沖液。
 
  2、樣品的稀釋濃度:樣品的稀釋濃度同樣是不可忽視的因素,由于樣品中不可避免存在一些細小的顆粒,尤其是核酸樣品。這些小顆粒的存在干擾測試效果。為了較大程度減少顆粒對測試結果的影響,要求核酸吸光值至少大于0.1A,吸光值在0.1-1.5A。在此范圍內,顆粒的干擾相對較小,結果穩定。從而意味著樣品的濃度不能過低,或者過高(超過光度計的測試范圍)。
 
  3、ASD光譜儀操作因素:如混合要充分,否則吸光值太低,甚至出現負值;混合液不能存在氣泡,空白液無懸浮物,否則讀數漂移劇烈;必須使用相同的比色杯測試空白液和樣品,否則濃度差異太大;換算系數和樣品濃度單位選擇一致;不能采用窗口磨損的比色杯;樣品的體積必須達到比色杯要求的較小體積等多個操作事項。
 

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