ELISA試劑盒檢測(cè)試劑每次試驗(yàn)、每塊扳上都要設(shè)置以下3項(xiàng)對(duì)照和用途：
1．空白對(duì)照：僅用稀釋液代替檢測(cè)樣本、ELISA試劑盒用來(lái)觀察zui終反應(yīng)的顯色“本底"、ELISA試劑盒并用于酶標(biāo)儀消除、扣除“本底"，也就是說(shuō)：以本底為“零"讀取陽(yáng)性、陰性對(duì)照孔和樣本檢測(cè)孔的吸光值（A）；或者，在計(jì)算陰性對(duì)照均值（NCx）、陽(yáng)性對(duì)照均值（PCx）、樣本讀數(shù)的S/C.O.值時(shí)減去空白對(duì)照的本底吸光值。早期的酶標(biāo)儀沒(méi)有自動(dòng)扣除空白對(duì)照孔讀數(shù)的功能，ELISA試劑盒這種酶標(biāo)儀現(xiàn)在已經(jīng)被淘汰了，寫(xiě)上這段話的目的是補(bǔ)充說(shuō)明設(shè)置空白對(duì)照的用途。空白孔具體如何讀取讀數(shù)，應(yīng)該按照說(shuō)明書(shū)操作。
2．陰性對(duì)照：
（1）陰性對(duì)照的含義與要求：ELISA試劑盒所謂陰性對(duì)照，是本次檢測(cè)試驗(yàn)中采用與待檢測(cè)物（樣品、人用試劑就是人的血清等）具有同源性和同質(zhì)性，又不含有待檢物質(zhì)，并且能夠客觀比較和鑒別處理因素（血清免疫學(xué)試驗(yàn)中有特異性抗原與抗體反應(yīng)）之間的差異。因此，用動(dòng)物血清或其制品代替陰性人血清作為對(duì)照品，無(wú)論是從理論還是實(shí)踐上都是不可取的。注意：據(jù)我所知，國(guó)產(chǎn)ELISA試劑盒中，有的廠家是用動(dòng)物血清制品稀釋配置或與部分人血清混合配置的；陰性對(duì)照讀數(shù)，并不是“越低越好"。NCx值接近0.00X水平，這是假象！試想一下，真正采用“陰性人血清"的陰性對(duì)照品，NCx值會(huì)如此之低嗎？例如，雅培乙肝六項(xiàng)ELISA試劑盒的NCx值，分別為：0.010（HBsAg）、0.027（抗—HBs）、0.035（HBeAg）、1.083（抗—HBe）、1.065（抗—HBc）、0.045（抗HBc-IgM）。生物梅里埃的HIV試劑NCx是0.091。辨別試劑NCx值是否合理的一個(gè)很簡(jiǎn)單的方法，只要對(duì)比大量陰性樣本的實(shí)際讀數(shù)就“一目了然"啦！
（2）陰性對(duì)照分為兩類
一是受檢人血清中并不含有或方法學(xué)靈敏度未能檢出的待檢物的基準(zhǔn)水平，并且結(jié)果判斷值（Cut off）計(jì)算式中決定“是"（陽(yáng)性）、或“否"（陰性）的*可變值。陰性對(duì)照值高，導(dǎo)致假陰性；反之，ELISA試劑盒導(dǎo)致假陽(yáng)性。二是陰性對(duì)照設(shè)置，在方法學(xué)上要求加入指示性定量標(biāo)準(zhǔn)品，ELISA試劑盒如中和劑HBeAg，定量HBcAg等，用以檢測(cè)抗—HBe、抗—HBc。或者，選取代表平均水平的正常人血清用作陰性對(duì)照，ELISA試劑盒如檢測(cè)抗—HBc IgM。此類Cut off 值計(jì)算時(shí)，多數(shù)均包括陰性和陽(yáng)性對(duì)照值2個(gè)可變值。