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PURELAB flex可以清除內(nèi)毒素

閱讀:2080      發(fā)布時(shí)間:2015-12-1
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 URELAB flex(配ELGA生物過濾器)性能
規(guī)格
• 內(nèi)毒素 <0.001 EU/ml
• RNase <0.002 ng/ml
• DNase <20 pg/ml (<0.02 pg/μl)
• 細(xì)菌 <10 CFU/100ml(<0.1 CFU/ml)
PURELAB flex以純水或自來水做進(jìn)水連續(xù)生產(chǎn)超純水。 安裝ELGA LabWater生物過濾器后,即可生產(chǎn)去除了生物活性雜質(zhì)的超純水。
去除了生物活性雜質(zhì)的超純水適于細(xì)胞培養(yǎng)等生物化學(xué)和分子生物學(xué) 應(yīng)用。

內(nèi)毒素

內(nèi)毒素是革蘭氏陰性活菌外膜脫落的脂多糖。 細(xì)菌細(xì)胞死亡時(shí)釋放出內(nèi)毒素。

內(nèi)毒素與細(xì)胞相互作用,造成多種不利影響(參考文獻(xiàn)1 Dawson和參考文獻(xiàn)2 Nagano)。 內(nèi)毒素對(duì)試管內(nèi)受精(參考文獻(xiàn)3 Dumoulin)和細(xì)胞培養(yǎng)(參考文獻(xiàn)4 Stacey)等其他應(yīng)用影響很大。

實(shí)驗(yàn)(細(xì)胞分裂、電泳及其他生化工藝等)可靠性的提高得益于內(nèi)毒素的清除。

在pH >2 時(shí),內(nèi)毒素帶負(fù)電,使用ELGA LabWater生物過濾器等帶正電過濾器可將其有效清除。帶電的過濾器對(duì)水流構(gòu)成的障礙zui小,作為純水系統(tǒng)的終端過濾器。

內(nèi)毒素挑戰(zhàn)實(shí)驗(yàn)

對(duì)生物過濾器的挑戰(zhàn)實(shí)驗(yàn)是向帶正電的過濾器進(jìn)水中不斷注入高含量的內(nèi)毒素,然后采用鱟變形細(xì)胞溶解物試驗(yàn)(動(dòng)態(tài)濁度法)測(cè)量產(chǎn)水中的內(nèi)毒素濃度。

大多數(shù)的內(nèi)毒素挑戰(zhàn)實(shí)驗(yàn)均要使用凈化的LPS。 ELGA LabWater的科研團(tuán)隊(duì)從純水中已有的細(xì)菌中生產(chǎn)出自己的LPS。 這是為了模仿逼真的挑戰(zhàn)實(shí)驗(yàn)環(huán)境。

首先從純水中分離出細(xì)菌。然后將細(xì)菌接種到蛋白胨水中,在27℃的溫度下培養(yǎng)。對(duì)樣品反復(fù)進(jìn)行加熱處理,用0.45μm過濾膜進(jìn)行過濾,由此得到濃縮的內(nèi)毒素。

每個(gè)挑戰(zhàn)實(shí)驗(yàn)持續(xù)5分鐘,得出以下總挑戰(zhàn)實(shí)驗(yàn)結(jié)果:即使挑戰(zhàn)實(shí)驗(yàn)超過了90 EU/ml,總挑戰(zhàn)實(shí)驗(yàn)接近800000 EU,在生物過濾器后的產(chǎn)水中也未能檢測(cè)出內(nèi)毒素(<0.001EU/ml)。

實(shí)際上,過濾器的進(jìn)水中內(nèi)毒素的含量極低(<0.1EU/ml)。為了更逼真地模仿實(shí)際情況,以內(nèi)毒素含量為1EU/ml(標(biāo)稱)的純水做進(jìn)水,對(duì)生物過濾器做長(zhǎng)時(shí)間的測(cè)試:在流過800升后仍未能檢出內(nèi)毒素(<0.001EU/ml)。

DNase與RNase

很多人擔(dān)心純水中可能存在RNase與DNase等其他生物活性雜質(zhì)。

純水中存在此類雜質(zhì)可能會(huì)給實(shí)驗(yàn)帶來嚴(yán)重的干擾。但是,離子交換樹脂和紫外燈可將其去除。定期殺菌和維護(hù)的設(shè)計(jì)*的純水系統(tǒng),其產(chǎn)水中不含此類雜質(zhì)。

本檢測(cè)使用增強(qiáng)版Ambion® Alert測(cè)試程序,該程序基于檢測(cè)可裂解熒光標(biāo)記RNase或DNase基質(zhì)。 測(cè)試結(jié)果表明RNase的檢測(cè)含量較低,達(dá)到 <0.002 ng/ml,DNase的含量為<20 pg/ml。即使此類雜質(zhì)很高,PURElAB flex(配生物過濾器)也能有效地去除了RNase和DNase(RNase<0.002 ng/
ml,DNase<0.02 ng/ml)。PURELAB flex(配生物過濾器)生產(chǎn)的純水可以替換限制使用二乙基焦碳酸(DePc)做水處理的情況(按照ELGA LabWater的建議,其對(duì)殺菌與維護(hù)有限制)。

TOC與電阻率沖洗

在從設(shè)備的產(chǎn)水中清除任何內(nèi)毒素的同時(shí),該生物過濾器必須不對(duì)水造成污染。 新過濾器使用時(shí),快速電阻率與TOC沖洗十分方便;同時(shí),也清楚表明其對(duì)產(chǎn)水的污染會(huì)始終很低。 這一點(diǎn)很重要,因?yàn)橥ㄟ^過濾器的產(chǎn)水純度是無法監(jiān)測(cè)的。生物過濾器的TOC與電阻率快速?zèng)_洗如上圖所示。

細(xì)菌挑戰(zhàn)實(shí)驗(yàn)
在PURELAB flex內(nèi),純水循環(huán)流過紫外燈,接受254和185nm的強(qiáng)紫外線照射,將細(xì)菌含量控制在極低水平。采用具有0.2μm細(xì)菌過濾能力的生物過濾器將剩余的微量細(xì)菌清除掉。在使用內(nèi)含1 x 107 CFU/ml的料液進(jìn)行細(xì)菌挑戰(zhàn)實(shí)驗(yàn)時(shí),生物過濾器*清除了細(xì)菌:等效于對(duì)數(shù)減少系數(shù)>8。

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