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疏水作用色譜概述
閱讀：3310發(fā)布時(shí)間：2016-1-20
疏水作用色譜始于1972年SHaltiel及其工作者，他們利用帶有碳?xì)浠衔锱浠沫傊悄z以“疏水親和色譜”分離蛋白 質(zhì)。在其他實(shí)驗(yàn)室內(nèi)也進(jìn)行了類似研究和探索，1976年Hofstee將這種類型的色譜命名為疏水作用色譜。1980 年前后，不少學(xué)者就疏水作用的機(jī)理、分離規(guī)律等進(jìn)行了大量研究，但這些工作多是用軟或半硬基質(zhì)進(jìn)行的，其基本形式是將短烷基鏈鍵合于親水性基球上，作為配 基的烷基鏈的密度通常不大，且操作壓力和流速均不能提高。為改善HIC的分離效率和分離速度，出現(xiàn)了以硬質(zhì)高聚物微球、硅膠以及CPG為基質(zhì)的HIC 固定相。 
與其他類型相比，對(duì)用于這種填料的硅膠基質(zhì)并沒有特殊的要求，只要孔徑在25-100nm之間且有較大的比表面積就可以應(yīng)用，與對(duì)CPG的要求相似。只要經(jīng)過表面修飾或涂層，使其具有合適的親水表面和較弱的疏水基，就可以制備出疏水作用色譜。
盡管曾研究過不同類型的疏水作用固定相，但有實(shí)用價(jià)值的主要是兩類。一類是在基質(zhì)表面鍵合上短鏈烷烴或苯基而成，例如，TOSOH公司的Pheny- TSK -Gel 3000SW、Butyl-TSK 3000 SW柱均是很典型的商品HPHIC柱。另一類是醚型鍵合相。在硅膠上先鍵合上環(huán)氧丙氧基三乙氧基硅烷，再在路易士酸催化下接上短鏈烷氧基而成
盡管曾研究過不同類型的疏水作用固定相，但有實(shí)用價(jià)值的主要是兩類。一類是在基質(zhì)表面鍵合上短鏈烷烴或苯基而成，例如，TOSOH公司的Pheny- TSK -Gel 3000SW、Butyl-TSK 3000 SW柱均是很典型的商品HPHIC柱。另一類是醚型鍵合相。在硅膠上先鍵合上環(huán)氧丙氧基三乙氧基硅烷，再在路易士酸催化下接上短鏈烷氧基而成
如果將聚乙二醇與環(huán)氧化硅膠反應(yīng)，則可制備出聚乙二醇型HIC 填料。作者的實(shí)驗(yàn)室曾以可控孔徑玻璃為基質(zhì)，鍵合以聚乙二醇，制備出HIC填料。這種填料，系無定型顆粒，粒徑分25-37及5-10μm 兩種。孔徑有30、60 以及100nm等幾種。使用了分子量為400、600、800、1000及2000的PEG為配基，研究了不同色譜條件下蛋白質(zhì)的分離行為。結(jié)果表明隨 PEG鏈長的增加，蛋白質(zhì)的保留加大，比較適宜的是PEG600-1000。對(duì)一般生化分離而言，孔徑30-60nm較為合適。以結(jié)晶胰蛋白酶為樣品， 經(jīng).:( 分離后的活性回收率為近100%，表明這種.:( 填
料很適合于蛋白質(zhì)的分離。耿信篤等以硅膠為基質(zhì)，以改性聚乙二醇為配基，制備了用 于蛋白質(zhì)分離的HIC 填料。在分離基因重組γ- 干擾素時(shí)發(fā)現(xiàn)，干擾素的活性回收率有異乎尋常的升高。經(jīng)研究后認(rèn)為，這是由于HIC分離過程有利于變性蛋白的復(fù)性所致。這更加說明，HIC是生物大分子分 離和純化的一個(gè)重要的手段。
料很適合于蛋白質(zhì)的分離。耿信篤等以硅膠為基質(zhì)，以改性聚乙二醇為配基，制備了用 于蛋白質(zhì)分離的HIC 填料。在分離基因重組γ- 干擾素時(shí)發(fā)現(xiàn)，干擾素的活性回收率有異乎尋常的升高。經(jīng)研究后認(rèn)為，這是由于HIC分離過程有利于變性蛋白的復(fù)性所致。這更加說明，HIC是生物大分子分 離和純化的一個(gè)重要的手段。
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