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細胞凋亡在許多細胞系統中是一種被充分證實的現象它在胚胎發生期間的組織和器官發育以及調節成體組織的細胞更新中起關鍵作用。在免疫系統中，凋亡提供了胸腺自身反應性T細胞2、生發中心低反應性B淋巴細胞3以及易受細胞毒性T淋巴細胞和自然殺傷細胞攻擊的靶細胞的缺失機制。1,4在結構上，細胞凋亡的特征是染色質凝聚、細胞大小減小和核酸內切酶將DNA切割成核小體大小的片段。1,4,5除了這些細胞形態的變化發生在細胞凋亡過程中，細胞膜磷脂不對稱性的喪失是一個重要的事件，磷脂酰絲氨酸(PS)從磷脂雙分子層的內小葉轉移到細胞表面雖然PS外化的功能尚不清楚，但它可能是吞噬細胞識別的“信號"，吞噬細胞通過吞噬凋亡細胞作出反應。

在失去質膜完整性之前。暴露于細胞表面的PS為檢測細胞凋亡提供了一種簡單的方法。膜聯蛋白V (Mr 36-kDa)是鈣依賴性磷脂結合蛋白膜聯蛋白家族的一員，對含ps的磷脂雙分子層具有高親和力。當PS暴露在細胞膜的細胞外表面時，膜聯蛋白V以大約7納米的親和力結合膜聯蛋白V的熒光染料偶聯物可用于監測細胞膜磷脂不對稱性的變化10-13，從而提供了一種方便的工具。

由于PS外化發生的時間早于與凋亡相關的細胞核變化，因此ApoScreen Annexin V凋亡試劑盒可用于比基于dna的檢測更早地檢測凋亡途徑中的細胞標記膜聯蛋白V也可用于分析膜的變化，行星和紅細胞的不對稱單個ApoScreen標記的膜聯蛋白V試劑見產品號10040-02和10040-09。

試驗原理

ApoScreen Annexin V凋亡試劑盒采用r -植物紅蛋白標記的Annexin V (Annexin V- r - pe)7-AAD評估細胞凋亡亞群。在細胞凋亡的早期階段，細胞開始在外細胞膜上顯示PS，通過膜聯蛋白V-R-PE染色細胞很容易檢測到PS。隨著在細胞凋亡的后期，質膜變得越來越通透，7-AAD可以很容易地穿過細胞膜并與細胞DNA結合，為識別那些通過壞死等機制失去膜完整性的細胞提供了一種手段。當細胞被膜聯蛋白V-R-PE和7-AAD雙重染色時，可以觀察到三種不同的細胞群(圖2):(i)活細胞不被膜聯蛋白VR-PE或7-AAD染色;(ii)兩種試劑染色的壞死細胞;(iii)僅膜聯蛋白V-R-PE染色的凋亡細胞。分析可以在任何配備單個激光的流式細胞儀上進行，激發波長為488nm。

設備組件

1ml annexin V-R-PE:保存在2-8°C。按指示使用;無需預稀釋。

1 mL 7-AAD(100次):保存在2-8°C。按指示使用;無需預稀釋。避免皮膚接觸并妥善處理。

7 × 1.5 mL 10X結合緩沖液:保存在2-8°C。使用前用9份dH20稀釋1份10X緩沖液。