菌落總數的快速測定方法
 

1 適用范圍：可用于各類食品及原料中菌落總數的測定。也可用于與食品接觸的容器、操作臺和其他設備表面的衛生檢測。

2 方法原理：將營養培養基、凝膠和氯化三苯基四氮唑（TTC）顯色劑等加載在試紙片，經加樣、培養后，細菌菌落在測試片上顯現出紅色菌斑，通過計數報告結果。

3 操作方法

3.1  樣品處理：無菌稱取樣品25g（或25mL）放入含有225mL無菌生理鹽水的采樣瓶或均質杯內，經充分振搖（均質）做成1:10的稀釋液。用1mL滅菌吸管吸取1:10稀釋液1mL，注入含有9mL滅菌生理鹽水的試管內，用1mL滅菌吸管反復吸吹制成1:100的稀釋液。以此類推，做出1:1000等稀釋度的稀釋液，每個稀釋度更換一支滅菌吸管。

3.2  接種：一般食品選2～3個稀釋度進行檢測，含菌量少的液體樣品（如食用純水和礦泉水等）可直接用原液檢測。將測試片放在水平臺面上，揭開上面的透明薄膜，用滅菌吸管吸取樣品原液或稀釋液1mL，均勻加到中央的紙片上，輕輕將上蓋膜放下，靜置5 min使培養基凝固，zui后用手輕輕地壓一下。每個稀釋度接種兩片。

3.3  培養： 將測試片疊在一起放回原自封袋中，透明面朝上水平置于恒溫培養箱內，堆疊片數不超過12片。培養溫度為36℃±1℃，培養15～24h。

4 結果判斷與計數：

4.1  細菌在紙片上生長后會顯示紅色斑點，選擇菌落數適中（10個～100個）的紙片進行計數，乘以稀釋倍數后即為每克（或毫升）樣品中所含的細菌菌落總數。菌落數在100以內時，按實有數報告。大于100時，用二位有效數字，二位有效數字后面的數字，以四舍五入方法計算，并以10的指數來表示。

4.2  計數原則與報告方式

4.2.1  通常選擇菌落在10個～100個之間的紙片進行計數，乘以稀釋倍數報告之（見下表中例次1）。國家標準菌落總數報告方式術語為cfu/g或mL，cfu的含義為菌落形成單位。

4.2.2  若有兩個稀釋度的菌落數在10個～100個之內，兩者的比值小于2，則取其平均數，若大于2，則采用稀釋度小者報告。

4.2.3 若三個稀釋度的菌落數都有在10個～100個之內時，應選擇二個低數值的平均數。

4.2.4  若三個稀釋度的菌落數均小于10個或大于100個時，應重新試用更低或更高的稀釋度進行菌落計數；或采用均小于數量標準的zui小值，或采用均大于數量標準的zui大值。

5  表面取樣方法：加1mL滅菌生理鹽水在測試片上，靜置至少1h使培養基凝固；提起上層膜，使中央濾紙部分貼到待測物表面，用手在外側輕壓；然后將上蓋膜合上，置培養箱內培養。

6  注意事項：使用過的紙片上帶有活菌，需及時按照生物安全廢棄物處理原則進行處理。