上海喆圖科學儀器有限公司
食品微生物學檢驗 霉菌和酵母計數
檢測樣品:乳制品 奶制品 番茄醬 番茄汁
檢測項目:霉菌 酵母
方案概述:本標準規定了食品中霉菌和酵母(mouldsandyeasts)的計數方法。本標準第一法適用于各類食品中霉菌和酵母的計數,第二法適用于番茄醬罐頭、番茄汁中霉菌的計數。
1范圍
本標準規定了 食品中霉菌和酵母 (moulds and yeasts)的計數方法
本標準第一法適用于各類食品中霉菌和酵母的計數,第二法適用于番茄醬罐頭、番茄汁中霉菌的計數。
2設備和材料
除微生物實驗室常規滅菌及培養設備外,其他設備和材料如下:
2.1 培養箱:28°C士1°C。
2.2 拍擊式均質器及均質袋。
2.3電子天平:感量 0.1g。
2.4 無菌錐形瓶:容量 500 mL。
2.5 無菌吸管:1 ml(具0.01ml,刻度)、10 ml(具0.1 ml.刻度)。
2.6 無菌試管:18 mm × 180 mm。
2.7 旋渦混合器。
2.8 無菌平四:直徑 90 mm。
2.9 恒溫水浴箱:46°C士1°。
2.10 顯微鏡:10倍~100倍。
2.11 微量移液器及槍頭:1.0 ml。
2.12 折光儀。
2.13 郝氏計測玻片:具有標準計測室的特制玻片。
2.14 蓋玻片。
2.15 測微器:具標準刻度的玻片。
操作步驟
5.1 樣品的稀釋
5.1.1 固體和半固體樣品:稱取25g樣品,加人 225 ml. 無菌稀釋液(蒸餾水或生理鹽水或磷酸鹽緩沖液),充分振搖,或用拍擊式均質器拍打 1min~2min,制成1:10的樣品勻液。
5.1.2 液體樣品:以無菌吸管吸取25mL 樣品至盛有225 mL 無菌稀釋液(蒸餾水或生理鹽水或磷酸鹽緩沖液)的適宜容器內(可在瓶內預置適當數量的無菌玻璃珠)或無菌均質袋中,充分振搖或用拍擊式
均質器拍打 1 min~2 min.制成1:10的樣品勻液。
5.1.3 取1ml1:10樣品勻液注人含有9 mL 無菌稀釋液的試管中,另換一支1mL 無菌吸管反復吹吸,或在旋渦混合器上混勻,此液為 工:100 的樣品勻液。
5.1.4 按5.1.3操作,制備 10 倍遞增系列稀釋樣品勻液。每遞增稀釋一次,換用1支1ml 無菌吸管。
5.1.5 根據對樣品污染狀況的估計,選擇2個~3個適宜稀釋度的樣品勻液(液體樣品可包括原液),在進行10倍遞增稀釋的同時,每個稀釋度分別吸取1ml 樣品勻液于2個無菌平四內。同時分別取1 ml
無菌稀釋液加人2個無菌平皿作空白對照。
5.1.6 及時將20 mL~25ml- 冷卻至46°C 的馬鈴薯葡萄糖瓊脂或孟加拉紅瓊脂(可放置于 46°士
1°C恒溫水浴箱中保溫,傾注平四,并轉動平皿使其混合均勻。置水平臺面待培養基基本凝固。
5.2 培養
瓊脂凝固后,正置平板,置28°C士1°C培養箱中培養,觀察并記錄培養至第5d的結果。
5.3 菌落計數
用肉眼觀察,必要時可用放大鏡或低倍鏡,記錄稀釋倍數和相應的霉菌和酵母菌落數。以菌落形成單位(colony-forming units, CFU)表示。
選取菌落數在 10 CFU~150 CFU 的平板,根據菌落形態分別計數霉菌和酵母。霉菌蔓延生長覆
蓋整個平板的可記錄為菌落蔓延。
6結果與報告
6.1結果
6.1.1 計算同一稀釋度的兩個平板菌落數的平均值,再將平均值乘以相應稀釋倍數。
6.1.2 若有兩個稀釋度平板上菌落數均在 10 CFU~150 CFU 之間,則按照GB 4789.2的相應規定進行計算。
6.1.3 若所有平板上菌落數均大于 150 CFU,則對稀釋度最高的平板進行計數,其他平板可記錄為多
不可計,結果按平均菌落數乘以最高稀釋倍數計算。
6.1.4 若所有平板上菌落數均小于 10 CFU,則應按稀釋度的平均菌落數乘以稀釋倍數計算。
6.1.5 若所有稀釋度(包括液體樣品原液)平板均無菌落生長,則以小于 1乘以稀釋倍數計算。
6.1.6 若所有稀釋度的平板菌落數均不在 10 CFU~150 CFU 之間,其中一部分小于 10 CFU 或大于
150 CFU 時,則以 10 CFU 或 150 CFU 的平均菌落數乘以稀釋倍數計算。
6.2 報告
6.2.1 菌落數按“四舍五人”原則修約。菌落數在 10以內時,采用一位有效數字報告;菌落數在 10~
100 之間時,采用兩位有效數宇報告。
6.2.2 菌落數大于或等于 100 時,前第了位數字采用“四舍五人”原則修約后,取前2位數字,后面用。
代替位數來表示結果;也可用10 的指數形式來表示,此時也按“四舍五人”原則修約,采用兩位有效數字。
6.2.3 若空白對照平板上有菌落出現,則此次檢測結果無效。
6.2.4 稱重取樣以CFU/g 為單位報告,體積取樣以 CFU/mL 為單位報告,報告或分別報告霉菌和/或
酵母數。
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