AB100 小量全血DNA提取試劑盒
| 參考價 | ￥ 280 |
| 訂貨量 | ≥1 |
具體成交價以合同協議為準
- 公司名稱 北京艾比根生物技術有限公司
- 品牌
- 型號 AB100
- 產地 北京艾比根
- 廠商性質 經銷商
- 更新時間 2017/7/24 15:50:12
- 訪問次數 1023
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| ◆ TRIpure Reagent 抽提指南 |
| ◆ 目錄號 RP02 |
| ◆ 使用手冊 |
| ◆ 實驗室使用，僅用于體外 |
| ◆ TRIpure Reagent 抽提指南 |
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北京艾比根生物技術有限公司 / ：www.abigen.com ：info@abigen.com
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產品說明書
2010年第二版
| ◆ 小量全血DNA提取試劑盒 |
| ◆ 目錄號 AB101 |
| ◆ 使用手冊 |
| ◆ 實驗室使用，僅用于體外 |
| ◆ ： |
v 適用范圍：
適用于快速提取各種動物全血基因組DNA
v 試劑盒組成、儲存、穩定性：
| 試劑盒組成 | 保存 | 50次×0.3ml AB1011 | 100次×0.3ml AB1012 | 200次×0.3ml AB1013 |
| 10x紅細胞裂解液 | 室溫 | 5 ml | 10 ml | 20 ml |
| 細胞核裂解液 | 室溫 | 15 ml | 30 ml | 60 ml |
| 蛋白沉淀液 | 室溫 | 5 ml | 10 ml | 20 ml |
| DNA溶解液 | 室溫 | 10 ml | 20 ml | 20 ml |
本試劑盒在室溫儲存18個月不影響使用效果。
儲存事項:
1. 環境溫度低時細胞核裂解液中某些去污劑成份會析出出現渾濁或者沉淀，可在37℃水浴加熱幾分鐘，即可恢復澄清，不要劇烈搖晃，以免形成過量的泡沫。
2. 蛋白沉淀液可能出現析出和沉淀，可以在37℃水浴幾分鐘幫助重新溶解，如果不能*溶解，也不影響使用效果，直接取用上層溶液即可。
3. 避免試劑長時間暴露于空氣中產生揮發、氧化、pH值變化，各溶液使用后應及時蓋緊蓋子。
v 產品介紹：
本試劑盒根據全血特點采用幾個快速步驟提取基因組DNA。首先紅細胞裂解液裂解去除不含DNA的紅細胞，細胞核裂解液裂解白細胞釋放出基因組DNA，然后蛋白沉淀液選擇性沉淀去除蛋白，zui后純凈的基因組DNA通過異丙醇沉淀并重溶解于DNA溶解液。
v 注意事項
1. 用戶需自備異丙醇和70％乙醇。
2. 典型的產量300µl全血可提取出5-15µg 基因組DNA（不同樣品尤其疾病樣品中白細胞數量差異可能非常大，因此產量的個體差異也可能非常大）。
3. 本試劑盒為溶液型，可以很容易的按照比例擴大或者縮小每次處理的全血量（20µl-10ml），請索取其它處理量的操作手冊。
4. 本試劑盒可運用于多種抗凝劑的全血，如EDTA、檸檬酸、肝素抗凝血。其中由于肝素抗凝血的白細胞沉淀團很難打散重懸，影響裂解效果，建議選用非肝素的抗凝劑收集血液標本。
5. 為了*效果，使用新鮮血液標本或者4℃存放小于3天的標本，不要使用反復凍融超過3次的標本，否則會嚴重降低產量。
v 操作步驟：（實驗前請先閱讀注意事項）
注意：使用前應該用去離子水將10x紅細胞裂解液稀釋10倍到1x。
2. 將抗凝全血（使用前回復到室溫）顛倒混勻后，吸取300μl加到上步裝有紅細胞裂解液的離心管中，顛倒6-8次，并倒置輕彈管壁，確保充分混勻。
3. 室溫放置10分鐘（期間應該顛倒輕彈，混勻數次幫助裂解紅細胞）。
4. 12,000rpm離心20秒，倒棄紅色上清，并小心的盡可能多的吸棄上清（注意不要吸到管底的細胞團），留下完整的管底白細胞團和大約10μl的殘留上清。
離心后在管底應該見到白色的白細胞團，也可能有一些紅細胞殘片和白細胞團在一起，但是如果看到的是大部分的紅色細胞團，說明紅細胞裂解很不充分，應該再加入900μl紅細胞裂解液重懸細胞團后重復步驟3，4。
5. 渦旋振蕩直到白細胞團充分重懸、分散。
白細胞的重懸分散對下一步裂解非常重要，白細胞未打散就加入細胞核裂解液，會導致白細胞不能充分裂解，形成肉眼可見團塊。
6. 加入300μl細胞核裂解液到重懸的白細胞，上下吹打裂解白細胞，或者劇烈渦旋10秒幫助裂解白細胞。
7. 可選步驟，一般不需要: 在裂解物中加入RNase A（10mg/ml）至終濃度30μg/ml，顛倒25次混勻，37℃溫育15分鐘去除殘留RNA，然后冷卻回室溫。
8. 加入100μl蛋白沉淀液后，在渦旋振蕩器上高速連續振蕩混勻25秒。混勻后可能見到一些小的蛋白團塊。
9. 13,000rpm離心5分鐘。這時候應該可以見到管底暗褐色的蛋白沉淀，也可能見到一些蛋白沉淀漂浮在液體表面。
10. 小心吸取上清（大約300μl）到一個新的1.5ml離心管中。
吸取上清時，注意不要吸到管底和漂浮在液體表面的蛋白沉淀。如果不小心將蛋白沉淀轉入新的離心管中，可再次離心2分鐘后取上清。
11. 加入等體積的室溫異丙醇（300μl），輕柔顛倒30次混勻或者直到出現棉絮狀（絲狀）白色DNA沉淀。
12. 12,000rpm離心1分鐘，在管底可以見到白色的DNA沉淀塊，倒棄上清。
13. 加入1ml70％乙醇，顛倒幾次漂洗DNA沉淀，12,000rpm離心1分鐘，倒去上清（注意不要把DNA沉淀倒掉了），倒置后在吸水紙上輕敲幾下以控干殘留乙醇，還可以用槍頭小心吸掉管底沉淀周圍和管壁的殘留乙醇，空氣晾干沉淀幾分鐘。
注意不要干燥過頭，否則DNA極其難溶；也不能殘留太多乙醇，否則乙醇可能抑制下游如酶切反應。
14. 加入100μlDNA溶解液重新溶解DNA沉淀，輕彈管壁混勻，可以放置在65℃溫育30-60分鐘（不要超過一小時），期間不時的輕彈管壁幫助重新水化DNA。也可以在室溫或者4℃放置過夜來重新水化DNA。
15. DNA可以存放在2-8℃，如果要長時間存放，可以放置在－20℃。
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