土壤酸性轉(zhuǎn)化酶（Solid-Acid invertase, S-AI）試劑盒說(shuō)明書(shū)

微量法 100 管/48 樣

正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定測(cè)定意義：

S-AI 在pH 為 4.5~5.0（酸性）條件下催化蔗糖不可逆地分解為果糖和葡萄糖，是土壤微生物蔗糖代謝關(guān)鍵酶之一。

測(cè)定原理：

S-AI 催化蔗糖降解產(chǎn)生還原糖，進(jìn)一步與 3,5－二硝基水楊酸反應(yīng)，生成棕紅色氨基化合物，在 510nm有特征光吸收，在一定范圍內(nèi) 510nm 光吸收增加速率與AI 活性成正比。

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試劑組成和配制：

試劑二：粉劑×1 瓶，4℃保存；臨用前加入 25ml 試劑一充分溶解備用；用不完的試劑 4℃保存。

自備儀器和用品：

可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、移液器、微量石英比色皿/96 孔板和蒸餾水。

樣品處理：

新鮮土樣自然風(fēng)干或 37 度烘箱風(fēng)干，過(guò) 30~50 目篩。

測(cè)定步驟和加樣表：

混勻， 37℃準(zhǔn)確水浴 30min 后，95℃水浴 10min（蓋緊，以防水分散失），流水冷卻后充分混勻（以保證濃度不變），10000g 25℃離心 10min，取上清液；

混勻，95℃水浴 10min（蓋緊，以防止水分散失），流水冷卻后充分混勻， 510nm 處，記錄各管吸光值A，如果吸光值大于 2，可以用蒸餾水稀釋后測(cè)定(計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù))，ΔA=A 測(cè)定-A 對(duì)照。

S-A I 活性計(jì)算：

a. 用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定的回歸方程為y = 0.0016x -0.001；x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（μg/ml），y 為吸光值。單位的定義：每天每 g 土樣中產(chǎn)生 1mg 還原糖定義為一個(gè)S-AI 活力單位。

S-AI 活力（mg/d /g 土樣）＝[(ΔA +0.001) ÷0.0016×V 反總÷W÷T ÷1000=240×(ΔA+0.001)

V 反總：反應(yīng)體系總體積：0.4ml；T：反應(yīng)時(shí)間，1/48d； W：樣本質(zhì)量，0.05g；1mg=1000μg。

b. 用 96 孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定的回歸方程為y = 0.0008x -0.001；x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（μg/ml），y 為吸光值。單位的定義：每天每 g 土樣中產(chǎn)生 1mg 還原糖定義為一個(gè)S-AI 活力單位。

S-AI 活力（mg/d/g 土樣）＝[(ΔA +0.001) ÷0.0008×V 反總÷W÷T ÷1000=480×(ΔA+0.001)

V 反總：反應(yīng)體系總體積：0.4ml；T：反應(yīng)時(shí)間，1/48d； W：樣本質(zhì)量，0.05g；1mg=1000μg。

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