BL6004 Na++K++-ATP酶檢測試劑盒 氧化磷酸化系列
- 公司名稱 北京諾博萊德科技有限公司
- 品牌 NobleRyder/諾博萊德
- 型號 BL6004
- 產地
- 廠商性質 經銷商
- 更新時間 2025/4/22 14:46:08
- 訪問次數 40
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| 供貨周期 | 現貨 | 規格 | 100T/48S |
|---|---|---|---|
| 貨號 | BL6004 | 應用領域 | 環保,化工,生物產業,農林牧漁,制藥/生物制藥 |
| 主要用途 | 廣泛分布于植物、動物、微生物和細胞中,可催化ATP 水解生成ADP 和無機磷。 |
Na+K+- ATP 酶活性測定說明書
微量法 100 管/48 樣
正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定測定意義：
Na+K+- ATP 酶廣泛分布于植物、動物、微生物和細胞中，可催化ATP 水解生成ADP 和無機磷。
測定原理：
Na+K+-ATP 酶分解ATP 生成ADP 及無機磷，通過測定無機磷的量來確定ATP 酶活性。
Na++K++-ATP酶檢測試劑盒 氧化磷酸化系列
試劑的組成和配制：
產品名稱 | BL6004-100T/48S | Storage |
提取液：液體 | 100ml | 4℃ |
試劑一：液體 | 10ml | 4℃ |
試劑二：粉劑 | 1 瓶 | -20℃ |
試劑三：液體 | 2ml | 4℃ |
試劑四：粉劑 | 1 瓶 | 4℃ |
試劑五：粉劑 | 1 瓶 | 4℃ |
試劑六：粉劑 | 1 瓶 | 4℃ |
試劑七：液體 | 25ml | 室溫 |
試劑八：10mmol/L 標準磷貯備 液 | 10ml | 4℃ |
說明書 | 一份 | |
試劑二：粉劑×1 瓶，-20℃保存；臨用前加入 6ml 蒸餾水充分混勻待用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融；
試劑四：粉劑×1 瓶，4℃保存。用時加入 3mL 蒸餾水， 4℃保存。
試劑五：粉劑×1 瓶, 4℃保存。用時加入 25ml 蒸餾水，溶解后 4℃保存一周；試劑六：粉劑×1 瓶, 4℃保存。用時加入 25ml 蒸餾水，溶解后 4℃保存一周；
0.5μmol/ml 標準磷應用液配制：將試劑八 20 倍稀釋，即取 0.1ml 試劑八加 1.9ml 蒸餾水充分混勻；定磷劑的配制：按 H2O: 試劑五:試劑六:試劑七=2:1:1:1 的比例配制，配好的定磷劑應為淺黃色。若無色則試劑失效，若是藍色則為磷污染，定磷劑現用現配。
注意：配試劑最好用新的燒杯、玻棒和玻璃移液器，也可以用一次性塑料器皿，避免磷污染。
具體產品的參數以收到產品說明書的參數為準
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計/酶標儀、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研缽、冰和蒸餾水。
樣品酶液的制備：
1、細菌、細胞或組織樣品的制備：
細菌或培養細胞：先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照細菌或細胞數量（104 個）：提取液體積（ml）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細菌或細胞加入 1ml 提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復 30 次）；8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。
組織：按照組織質量（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1ml 提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。
2、血清（漿）樣品：直接檢測。
操作步驟：
1、分光光度計或酶標儀預熱 30min 以上，調節波長至 660nm，蒸餾水調零。
2、酶促反應（在EP 管中加入下列試劑）：
對照管 | 測定管 | |
試劑一（μl） | 65 | 45 |
試劑二（μl） | 60 | 60 |
試劑三（μl） | 20 | |
樣本 （μl） | 100 |
混勻，37℃（哺乳動物）或 25℃（其他物種）準確水浴 10min
試劑四（μl） | 25 | 25 |
樣本 （μl） | 100 |
混勻，8000g，25℃離心 10min，取上清液 3、定磷（在EP 管或 96 孔板中加入下列試劑）
空白管 | 標準管 | 對照管 | 測定管 | |
0.5μmol/ml 標準磷應用液 （μl） | 20 | |||
上清液（μl） | 20 | 20 | ||
蒸餾水（μl） | 20 | |||
定磷試劑（μl） | 200 | 200 | 200 | 200 |
混勻，室溫放置 30min，在 660nm 處，記錄各管吸光值。
注意:
1、由于每一個樣都必須做對照，本試劑盒 100 管保證測 48 份Na+K+-ATP 酶。
2、此法具有微量、靈敏、快速的特點。所以對測定所用試管要求嚴格無磷。
3、空白管和標準管只要做一管。
計算:
1、血清（漿）Na+K+- ATPase 活力的計算:
定義：每小時每毫升血清（漿）中 Na+K+- ATP 酶分解ATP 產生 1μmol 無機磷的量為一個酶活力單位。
Na+K+-ATP 酶活力（μmol/h/ml）=[C 標準管×V 總]×（A 測定管-A 對照管）÷（A 標準管-A 空白管）÷V 樣÷T=7.5×（A 測定管-A 對照管）÷（A 標準管-A 空白管）
2、組織、細菌或細胞中Na+K+- ATPase 活力的計算：
（1） 按蛋白濃度計算：
定義：每小時每毫克組織蛋白中 Na+K+- ATP 酶分解ATP 產生 1μmol 無機磷的量為一個酶活力單位。
Na+K+-ATP 酶活力(μmol/h /mg prot)=[C 標準管×V 總]×（A 測定管-A 對照管）÷（A 標準管-A 空白管）÷（Cpr×V 樣）÷T =7.5×（A 測定管-A 對照管）÷（A 標準管-A 空白管）÷Cpr
（2） 按樣本鮮重計算：
定義：每小時每克組織中Na+K+-ATP 酶分解ATP 產生 1μmol 無機磷的量為一個酶活力單位。
Na+K+-ATP 酶活力(μmol/h /g 鮮重)=[ C 標準管×V 總]×（A 測定管-A 對照管）÷（A 標準管-A 空白管）÷(W× V 樣÷V 樣總)÷T=7.5×（A 測定管-A 對照管）÷（A 標準管-A 空白管）÷W
（3） 按細菌或細胞密度計算：
定義：每小時每 1 萬個細菌或細胞中Na+K+-ATP 酶分解ATP 產生 1μmol 無機磷的量為一個酶活力單位。
Na+K+-ATP 酶活力(μmol/h /104 cell) =[ C 標準管×V 總]×（A 測定管-A 對照管）÷（A 標準管-A 空白管）÷(500×V 樣÷V 樣總)÷T=0.015×（A 測定管-A 對照管）÷（A 標準管-A 空白管）
C 標準管：標準管濃度，0.5μmol/ml；V 總：酶促反應總體積，0.25ml；V 樣：加入樣本體積，0.1ml ； V 樣總：加入提取液體積，1ml；T：反應時間，1/6 小時；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/ml；W：樣本鮮重， g；500：細菌或細胞總數，500 萬。
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