產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

單細(xì)胞裂解液（RNA 專用）是單細(xì)胞 RNA 提取專用裂解液，產(chǎn)品經(jīng)過多次優(yōu)化，含有多種去污劑、變性劑和鹽，可有效抑制核酸酶在裂解過程中對(duì)核酸的  破壞，維持核酸的穩(wěn)定性。單細(xì)胞裂解物可以直接用于測(cè)序和 RT-PCR 等試驗(yàn)。

本產(chǎn)品足夠使用 200 次以上，一次可以處理 1-1000 個(gè)細(xì)胞。

產(chǎn)品參數(shù)：

產(chǎn)品規(guī)格

1mL

保存和運(yùn)輸

低溫運(yùn)輸，﹣20℃保存，有效期一年。

自備試劑

PBS 溶液

使用方法：

如何制備單個(gè)細(xì)胞取決于實(shí)驗(yàn)樣品和實(shí)驗(yàn)者所擁有的儀器設(shè)備，此處所列步  驟僅針對(duì)培養(yǎng)細(xì)胞、實(shí)體組織、淋巴細(xì)胞和卵裂球（2-8 細(xì)胞胚胎）等材料，對(duì)其他材料（如干細(xì)胞克隆、胚囊、胚胎組織等），用戶需自行選用合適的方法制備單細(xì)胞。對(duì)已經(jīng)處于單細(xì)胞懸浮狀態(tài)的細(xì)胞（如 FACS 分離細(xì)胞、卵細(xì)胞等）則可以跳過制備過程而直接進(jìn)入單細(xì)胞裂解步驟。

按下面手冊(cè)，本產(chǎn)品 1 次可以處理 1-1000 個(gè)細(xì)胞。下面的步驟是以制備單個(gè)細(xì)胞/裂解反應(yīng)為例，如果要制備 N 個(gè)細(xì)胞/裂解反應(yīng)的懸浮液，濃度需要相應(yīng)調(diào)整。

一、用培養(yǎng)細(xì)胞或?qū)嶓w組織制備單細(xì)胞

1.按常規(guī)胰-酶方法處理培養(yǎng)細(xì)胞或組織（一般是用 PBS 洗滌兩次，再用 0.25 % Trypsin-EDTA 處理 2 分鐘），將細(xì)胞重懸于自備的液體細(xì)胞培養(yǎng)基中。

2.按常規(guī)方法對(duì)細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)。

3.轉(zhuǎn)移 100-4000 個(gè)細(xì)胞到新離心管中，400×g 離心 4 分鐘沉淀細(xì)胞，小心棄上清（培養(yǎng)基）。

4.將細(xì)胞沉淀重懸于 50 μL 自備的 PBS 溶液中，使其終濃度為 2-80 個(gè)細(xì)胞 / μL。

5.在干凈的培養(yǎng)皿上點(diǎn)加數(shù)個(gè)含 5 μL PBS 溶液的小液滴，也可以在 96 孔板或

0.2 mL PCR 管中進(jìn)行。

6.  在第一個(gè)小液滴中加入 5 μL 細(xì)胞懸浮液，然后再?gòu)牡谝粋€(gè)小液滴中轉(zhuǎn)移 5 μL 到第二個(gè)小液滴，如此系列稀釋樣品數(shù)次，使得其濃度接近每 2.5 μL 液體中含 1 個(gè)細(xì)胞，放冰上待用。二、用單細(xì)胞裂解液裂解細(xì)胞

7.在顯微鏡下用顯微注射儀取 2.5 μL 樣品，確認(rèn)含一個(gè)細(xì)胞后，將其轉(zhuǎn)移到一

個(gè)含 2.5 μL 本產(chǎn)品的 PCR 管中。最好同時(shí)設(shè)置無樣品的陰性對(duì)照（2.5 μL樣品中不含細(xì)胞）。

8.細(xì)胞將在 5 分鐘內(nèi)裂解。

9.裂解液可以立即用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)（如 PCR 或 RT-PCR），也可以放冰上數(shù)小時(shí)待用。如果長(zhǎng)期不用，需要放-80℃保存。使用時(shí)從-80℃中取出后，放冰上融化后即可使用。

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