諾博萊德 口腔/yan拭子基因組DNA快速提取試劑盒 

yan拭子基因組DNA快速提取試劑盒（離心柱型）

目錄號(hào)：40310

v  適用范圍：

適合于從口腔/yan拭子中分離純化基因組DNA。

v 試劑盒組成、儲(chǔ)存、穩(wěn)定性：

本試劑盒在室溫儲(chǔ)存12個(gè)月不影響使用效果

儲(chǔ)存事項(xiàng)：

1.   結(jié)合液CB或者抑制物去除液IR低溫時(shí)可能出現(xiàn)析出和沉淀，可以在37℃水浴幾分鐘幫助重新溶解，恢復(fù)澄清透明后冷卻到室溫即可使用。

2. 為避免降低活性，方便運(yùn)輸，提供蛋白酶K為凍干粉狀，收到后，可短暫離心后，加入1毫升滅菌水溶解。因?yàn)榉磸?fù)凍融可能會(huì)降低酶活性，因此溶解后立即按照每次使用量分裝凍存，－20℃保存。

3.   避免試劑長(zhǎng)時(shí)間暴露于空氣中發(fā)生揮發(fā)、氧化、pH值變化，各溶液使用后應(yīng)及時(shí)蓋緊蓋子。

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)

v  產(chǎn)品介紹：

本試劑盒采用特制的進(jìn)口DNA吸附柱和獨(dú)tu的緩沖液系統(tǒng)，特別適合于從口腔/yan拭子中分離純化基因組DNA。各種來源樣品裂解消化處理后DNA在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于離心柱內(nèi)硅基質(zhì)膜（特別配備了Acryl Carrier可以從體系中輕松捕獲微量核酸），再通過一系列快速的漂洗－離心的步驟，將鹽、細(xì)胞代謝物、蛋白等雜質(zhì)去除，最后低鹽的洗脫緩沖液將純凈的基因組DNA從硅基質(zhì)膜上洗脫。純化后的DNA無雜質(zhì)和PCR抑制劑，可直接適用于PCR分析。

v產(chǎn)品特點(diǎn)：

1. 不需要使用有毒的ben酚等試劑，也不需要乙醇沉淀等步驟。

2. 節(jié)省時(shí)間，簡(jiǎn)捷，單個(gè)樣品操作一般可在20分鐘內(nèi)完成。

3. 配備了Acryl Carrier用于充分收集特別微量DNA。

4. 多次柱漂洗確保高純度，提取的DNA純度高，質(zhì)量穩(wěn)定可靠，可適用于各種常規(guī)操作，包括PCR、酶切、測(cè)序、Southern 雜交等。

v 注意事項(xiàng)：

1. 所有的離心步驟均在室溫完成，使用轉(zhuǎn)速可以達(dá)到13,000rpm的傳統(tǒng)臺(tái)式離心機(jī)，如Eppendorf 5415C或者類似離心機(jī)。

2.開始實(shí)驗(yàn)前將需要的水浴先預(yù)熱到特定溫度備用。

3.結(jié)合液CB 和抑制物去除液IR中含有刺激性化合物，操作時(shí)戴乳膠手套，避免沾染皮膚、眼睛和衣服。若沾染皮膚、眼睛時(shí)，要用大量清水或者生理鹽水沖洗。

4. Acryl Carrier：

1)Acryl Carrier 使用方法：如果起始處理量很少（口腔yan拭子上收集到的細(xì)胞很少），我們推薦使用Acryl Carrier，如果預(yù)期有較大量DNA產(chǎn)量，用戶可以根據(jù)需要選擇是否加入Acryl Carrier。使用時(shí)在每個(gè)樣品提取所需400μl結(jié)合液CB 中加入4μl Acryl Carrier，將結(jié)合液CB與Acryl Carrier溶液充分顛倒混勻即可(結(jié)合液CB容易起泡沫,請(qǐng)勿使用渦旋振蕩混勻)。也可根據(jù)樣品數(shù)量，在總共需要的結(jié)合液CB中加入總共需要的Acryl Carrier混勻備用。混合液在室溫24小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。

v  操作步驟：（實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)先閱讀注意事項(xiàng)）

提示：第一次使用前請(qǐng)先在15ml漂洗液WB中加入60ml無水乙醇，充分混勻，加入后請(qǐng)及時(shí)在方框打鉤標(biāo)記已加入乙醇，以免多次加入!

取樣：取一根醫(yī)用消毒棉簽（手不要碰觸脫脂棉部位），伸進(jìn)口腔，緊靠臉頰內(nèi)側(cè)來回刮拭20次（不時(shí)旋轉(zhuǎn)棉棒），需充分接觸口腔粘膜。

注意事項(xiàng)：避免用手觸及棉簽，采集前可先用清水輕輕漱口。為防止樣本被食物或者飲料污染，取樣前30分鐘內(nèi)應(yīng)該避免進(jìn)食或者飲水。

1.用剪刀將棉簽部分從其桿上剪下，放入2ml 離心管中，加入400μl裂解液ML。

2.再加入20μl的蛋白酶K (20mg/ml)溶液，立刻渦旋振蕩充分混勻，56℃放置1小時(shí)，期間每10分鐘渦旋混勻10秒。

3. 加入400μl結(jié)合液CB，立刻渦旋振蕩充分混勻，70℃放置10分鐘。

如果拭子上細(xì)胞數(shù)量少，導(dǎo)致提取的基因組DNA產(chǎn)量過低,可以在400μl結(jié)合液CB中加入4μl Acryl Carrier 。

4.冷卻后加200μl無水乙醇，立刻渦旋振蕩充分混勻。簡(jiǎn)短離心以除去管蓋內(nèi)壁的液滴，收集所有的液體到管底。

如果周圍環(huán)境高于25℃,乙醇需要冰上預(yù)冷后再加入。

5. 將上一步混合物加入一個(gè)吸附柱AC中，（吸附柱放入收集管中）13,000rpm離心30-60秒，倒掉收集管中的廢液。

棉簽的棉花可能還吸附一些液體，如果要提高產(chǎn)量，可以用干凈鑷子夾擠出液體后棄棉花，減少棉花上液體殘留。

6.加入500μl抑制物去除液IR，12,000rpm 離心30秒，棄廢液。

7. 加入500μl漂洗液WB（請(qǐng)先檢查是否已加入無水乙醇!），12,000rpm離心30秒，棄掉廢液。

8.加入500μl漂洗液WB，12,000rpm 離心30秒，棄掉廢液。

9. 將吸附柱AC放回空收集管中，13,000rpm離心2分鐘，盡量除去漂洗液，以免漂洗液中殘留乙醇抑制下游反應(yīng)。

10.取出吸附柱AC，放入一個(gè)干凈的離心管中，在吸附膜的中間部位加20－50μl洗脫緩沖液EB（洗脫緩沖液事先在65-70℃水浴中預(yù)熱效果更好）， 室溫放置1分鐘，12,000rpm離心1分鐘。將得到的溶液重新加入離心吸附柱中，室溫放置1分鐘，12,000rpm離心1分鐘。

洗脫體積越大，洗脫效率越高，如果需要DNA濃度較高，可以適當(dāng)減少洗脫體積，但是最小體積不應(yīng)少于20μl，體積過小降低DNA洗脫效率，減少DNA產(chǎn)量。

11. DNA可以存放在2-8℃，如果要長(zhǎng)時(shí)間存放，可以放置在－20℃。

v  問題與解決方法：

口腔/yan拭子基因組DNA快速提取試劑盒