產(chǎn)品簡介：

RT-LAMP MasterMix（熒光染料法）含有熒光 RT-LAMP 擴增所需的所有成分，可以用于實時熒光（但非定量）RT-LAMP 等溫擴增。RT-LAMP 即 Reverse Transcription Loop-Mediated Isothermal Amplification（逆轉(zhuǎn)錄-環(huán)介導等溫擴增），它利用 4 條模板專一的特異引物、逆轉(zhuǎn)錄酶和具有鏈置換能力的 Bst DNA 聚合酶，在等溫條件下(65℃左右) 30－60 分鐘完成逆轉(zhuǎn)錄和LAMP 擴增。該技術在靈敏度、特異性和檢測范圍等指標上能媲美甚至優(yōu)于定性 RT-PCR 技術。目前已成功應用于生物的快速檢測，廣泛用于各個領域。

產(chǎn)品特點：

1.即開即用，含有 LAMP 專用的熒光染料，可以進行實時熒光檢測（需要熒光 PCR 儀），但不建議用于定量分析。

2.高特異性，精心優(yōu)化的配方，非特異擴增比自配的試劑更低。

3.高擴增效率，一般比 RT-PCR 靈敏一個數(shù)量級。

4.65℃左右同時完成逆轉(zhuǎn)錄和等溫擴增，一步式操作。

5.本試劑盒足夠 50 次 20 ?L 體系的實時熒光 RT-LAMP 擴增。

6.提供擴增對照，便于在遇到困難時分析原因。

7.20 ?L 體系最多可以使用 13 ?L 樣本，減少漏檢。

8.RT-LAMP MasterMix（熒光染料法）只能用于科研，不能用于臨床。

產(chǎn)品參數(shù)：

產(chǎn)品規(guī)格

成分規(guī)格包裝

RT-LAMP MasterMix

（熒光染料法，待加酶）200 ?L0.5 mL 綠蓋管

逆轉(zhuǎn)錄酶-擴增酶混合液100 ?L0.5 mL 紅蓋管

LAMP 陽性對照

模板-引物混合物50 ?L0.5 mL 藍蓋管

使用手冊1 份無

保存和運輸

低溫運輸，-20℃保存，有效期一年。

自備試劑

RNA 模板、RT-LAMP 引物

使用方法：

1.制備模板RNA：用于選用合適的方法制備模板RNA。如果有N個樣品，最好設置N+2個樣品制備，多出的兩個一個是樣品制備陽性對照，一個是樣品制備陰性對照。

2.配制20×RT-LAMP引物混合液。

先加超純水將合成的HPLC級別的下列引物干粉稀釋到下表所標注的母液

濃度，然后在一新的離心管中按表中所列體積加入各種引物母液和超純水， 最后得到0.1 mL的20×RT-LAMP引物混合液，此混合液足夠100次20 ?L

體系的RT-LAMP擴增。如果需要配制的20×RT-LAMP引物混合液體積異 于0.1 mL，則各成分的用量請按比例調(diào)整。引物混合液可以在-20℃放置2 年。

注：如果沒有Loop引物，則用水替代。

3.在冰上融化RT-LAMP MasterMix（熒光染料法，待加酶），混勻，稍離心。第一次使用時，請將100uL逆轉(zhuǎn)錄酶-擴增酶混合液全部加入到RT-LAMP MasterMix中并輕柔顛倒混勻1分鐘，然后再使用。如果有N個樣品，則在 N+2個反應管中加入以下組份，多出的一管是RT-LAMP擴增陽性對照

（PC），一管是RT-LAMP擴增陰性對照（NC）：

成份N+2 個樣品管RT-LAMP

擴增PCRT-LAMP

擴增 NC

RT-LAMP MasterMix

（含熒光染料，加酶后）6 ?L6 ?L6 ?L

自備 20×RT-LAMP

引物混合液1 ?L不加1 ?L

LAMP 陽性對照

模板-引物混合物不加4 ?L不加

自備模板 RNA1-13 ?L不加不加

補自備超純水到20 ?L20 ?L20 ?L

4.混勻，放熒光定量PCR儀器上65℃保溫90分鐘，每分鐘采集一次SYBR通道的熒光信號。

5.結果分析：實驗有效性判定。如果兩個陽性對照能夠得到標準的S型擴增曲線而兩個陰性對照都沒有擴增，則實驗有效，才有必要對樣品進行分析。如果陽性對照沒有出現(xiàn)S型擴增曲線，則說明試劑盒可能失效，實驗無效。如果陰性對照有S型擴增曲線，則說明LAMP引物設計得不好，有非特異擴增， 需要重新優(yōu)化引物。也可能是環(huán)境或試劑有污染，實驗無效。遇到實驗無效的情況，請跟廠家客戶聯(lián)系，分析原因后再恢復實驗。

6. 如果實驗有效，則分析樣品。凡是有S擴增曲線的，可以判斷為陽性。凡是

沒有S擴增曲線的，可以判斷為陰性。典型的熒光檢測結果見下圖。左邊為陽性結果，擴增曲線為S型，右邊為陰性結果，擴增曲線不呈S型。

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