諾博萊德 超速全血（液體樣本）總RNA提取試劑盒

超速血液總 RNA 提取試劑盒FlashPure Blood Total RNA Kit

目錄號：91213

產品內容

自備試劑

無水乙醇

保存條件

室溫（15 ~ 25℃）

具體產品的參數以收到產品說明書的參數為準

產品簡介

采用 RNAzol LS Reagent 與吸附柱相結合提取總 RNA 的方法，簡化了RNA 提取的流程，與經典的異丙醇沉淀法相比，柱式純化方法簡便，去除雜質能力更強，大大提高了 RNA 的純度。該試劑盒可從各種血液、血漿、血清中快速提取總 RNA，每個吸附柱每次可處理 0.25ml 液體樣本或 5~10×10⁶細胞。提取的總 RNA 沒有 DNA 和蛋白的污染，可用于Northern Blot、Dot Blot、PolyA 篩選、體外翻譯、RNase 保護分析和分子克隆。

產品特點

1. RNA 純度更高；

2. 應用廣泛：可提取多種不同的樣本材料。

注意事項

1. 血液 RNA 的常溫保存/運輸/提取的簡易方案：

臨床取樣：在臨床上，使用抗凝管采血后，取 250 μl 新鮮血液，加入 750μl的裂解液RLS( RNAzol LS Reagent，Cat#91012-100)，用移液槍反復抽打并振蕩混勻，在室溫裂解5~10min，直至血細胞充分發生裂解。

保存：經裂解后的血液可在-20℃下保存 1-2 個月，在-70℃保存半年。

運輸：可冰袋 4℃運輸 1 天，干冰-20℃運輸一周。

提取：后續 RNA 提取按 R213（或 R012）的說明書進行。

2. 樣品應避免反復凍融，否則會影響 RNA 的提取得率和質量。

操作步驟（所有離心步驟均可在室溫下進行，不影響提取效果！）

操作前，請先在漂洗液 RW、70%乙醇中加入無水乙醇，詳見瓶身的標簽。

1. 每 250 μl 液體樣品 (血清、血漿、腦脊液、凍存血等)，加入 750 μl裂解液 RLS，用移液器反復抽打幾次，然后劇烈渦旋震蕩，充分混勻。

（液體樣品和裂解液 RLS 的終體積比總是 1：3）

2. 將勻漿樣品在室溫下放置 5 min，使得核酸蛋白復合物完quan分離。

3. 加入 200μl 氯仿，劇烈振蕩 15 秒，并在室溫下放置 2-3 分鐘。

4. 12,000 rpm 離心 10 min。樣品會分成三層：下層有機相，中間層和上層無色的水相，RNA 存在于水相中。水相層的容量大約為所加 RLS體積的 70%，轉移上清至一個新的離心管中，進行下一步操作。

5. 向上清中加入等體積 70％乙醇（檢查是否已加入乙醇），顛倒混勻。

6. 每次轉移≤750 μl 上清混合液（包括沉淀）至 RNA 吸附柱中，12,000rpm 離心 1 min，倒棄濾液。重復此過程，直到溶液全部上柱。

7. 加入 500μl 去蛋白液 RE，12,000 rpm 離心 1 min，倒棄濾液。

8. 加入 500 μl 漂洗液 RW，12,000 rpm 離心 1 min，倒棄濾液。

（注意：漂洗液 RW 中按要求加入無水乙醇，用后立即蓋緊瓶蓋，以防乙醇揮發）

9. 可選步驟：重復步驟 8 一次。

10. 將RNA吸附柱放回空收集管中，12,000 rpm 離心2min，去除乙醇。

11. 取出RNA吸附柱，放入一個新的 RNase-Free 1.5 ml 離心管中，向吸附膜的中央加入 30~50 μl 的RNase-Free ddH2O，室溫放置 2 min，12,000 rpm 離心 1 min。

（注意：如要要提高 RNA 濃度，可將得到的溶液重新加到吸附柱中，室溫放置2 min，再次離心收集）

12. 提取的 RNA，可直接用于下游實驗，或于-70℃保存，以免降解。

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