產品簡介：

常見的致瀉大腸埃希氏菌主要包括腸道致病性大腸埃希氏菌（Enteropathogenic Escherichia coli，EPEC）、腸道侵襲性大腸埃希氏菌（Enteroinvasive Escherichia coli，EIEC）、產腸毒素大腸埃希氏菌（Enterotoxigenic Escherichia coli，ETEC）、腸道出血性大腸埃希氏菌（Enterohemorrhagic Escherichia coli，EHEC）和腸道集聚性大腸埃希氏菌（Enteroaggregative Escherichia coli，EAEC）5 種。

本試劑盒適用于這五種致瀉性大腸埃希氏菌感染的輔助診斷及流行病學調查，其檢測結果僅供參考。

產品特點：

一、嚴格的質控體系

所有試劑盒從原料到成品都經過嚴格的質量控制，確保每一盒試劑盒都具有穩定可靠的質量，讓您的檢測結果更可信。

二、高靈敏度

產品經過不斷優化，具有出色的靈敏度，能夠檢測到極微量的五種致瀉性大腸埃希氏菌核酸，不放過任何潛在的感染風險。

三、便捷操作

綜合各項指標特性，研發出操作便捷的試劑盒。從樣本制備到結果分析，每一步都有清晰的操作指南，即使是新手也能輕松上手。

四、多樣的檢測驗證樣本

該試劑盒經過多種樣本的檢測驗證，適用于臨床樣本、食品樣品、增菌液及其培養物中提取的 DNA 樣本等多種常見樣本，滿足不同的檢測需求。

五、個性化定制服務

專業的研發團隊可為您提供個性化的定制服務，根據您的特殊需求進行產品優化和調整，為您提供更貼合實際的檢測方案。

六、豐富的產品線

除了五種致瀉性大腸埃希氏菌PCR檢測試劑盒，我們還提供Elisa試劑盒以及其它快檢試劑盒，滿足您在不同領域的檢測需求。

七、完善的售前售后服務

我們擁有完善專業的售前售后服務團隊，在您購買前為您提供詳細的產品咨詢和技術支持，購買后為您解決使用過程中遇到的任何問題，讓您無后顧之憂。

產品參數：

產品規格

50T/盒，可滿足一定規模的檢測需求。

檢測方法

實時熒光PCR，具有快速、準確、靈敏等優點。

適用儀器

ABI7500、安捷倫 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列熒光定量PCR 檢測儀。

標本采集

從臨床樣本、食品樣品、增菌液及其培養物中提取的 DNA 樣本。

保存和運輸

采集或處理好的樣品在 2℃~8℃條件下保存應不超過 24 h；若需長期保存，應放置-70℃以下保存，凍融不超過 3 次。

使用方法：

1.樣品處理（樣本處理區）

1.1樣本前處理

采用商品化試劑盒，按照試劑盒說明書進行操作。

1.2核酸提取

推薦采用公司生產的核酸提取-或純化試劑（磁珠法或離心柱法）進行核酸提取，請按照試劑說明書進行操作。

2.試劑配制（試劑準備區）

根據待檢測樣本總數，設所需要的 PCR 反應管管數為 N(N=樣本數+1 管陰性對照+1 管陽性對照；樣品每滿 10 份，多配制 1 份)。每管反應液同樣配置。

試劑反應液酶液

反應液 119μL1μL

反應液 219μL1μL

反應液 319μL1μL

分別將 3 個混合好的測試反應液分裝到 PCR 反應管中，20μL/管。

3.加樣（樣本處理區）

將步驟 1 提取的核酸、陽性質控品、陰性質控品各取 5μL，分別加入相應的反應管中，蓋好管蓋，混勻，短暫離心。

4.PCR 擴增（核酸擴增區）

4.1將待檢測反應管置于熒光定量 PCR 儀反應槽內；

4.2設置好通道、樣品信息，反應體系設置為 25μL；熒光通道選擇： 檢測通道（Reporter Dye）FAM，VIC 或 HEX，ROX， CY5， 淬滅通道（Quencher Dye）選擇 NONE，ABI 系列儀器請勿選擇 ROX 參比熒光，選擇 None 即可。

4.3推薦循環參數設置：

步驟循環數溫度時間收集熒光信號

11 cycle95℃2min否

240cycles95℃15sec否

60℃30sec是

*其它儀器比如 ABI7500 采集熒光設定為 31sec，對結果無影響。

5.1結果分析條件設定（請參照各儀器使用說明書進行設置，以分析 ABI7500 儀器為例）

反應結束后自動保存結果，根據分析后圖像調節 Baseline 的 Start 值、End 值以及 Threshold 值（用戶可根據實際情況自行調整，Start 值可設在 3～5、End 值可設在 10～15，使閾值線位于擴增曲線指數期，陰性質控品的擴增曲線平直或低于閾值線），點擊 Analyze 自動獲得分析結果。

5.2結果判斷

陽性：檢測通道 Ct 值≤40，且曲線有明顯的指數增長曲線； 陰性：樣本檢測結果無 Ct 值，且無特異性擴增曲線；

可疑：樣本檢測結果 40＜Ct 值≤45，建議重復檢測，如果檢測通道仍為 40<Ct 值≤45，且曲線有明顯的增長曲線，判定為陽性，否則為陰性。

多重項目熒光通道檢測項目

stx1/eae/stx2/bfpBFAM（stx1）eae（+）Stx1（-）bfpB（+）Stx2（-）判為典型 EPEC；eae（+）

Stx1（-）bfpB（-）Stx2（-）判為非典型 EPEC

VIC/HEX（eae）

ROX（stx2）eae（+/-）bfpB（-），Stx1  和 Stx2  至少一個為陽性判為 EHEC

CY5（bfpB）

ipaH/Stp/lt/SthFAM（ipaH）ipaH（+）判為 EIEC

VIC/HE（Stp）

Stp，Sth，lt 至少一個為陽性判為 ETEC

ROX（lt）

CY5（Sth）

aggR/uidA/astA/picFAM（aggR）aggR、pic、astA 中一條或者一條以上陽性均可判為 EAEC；

當只有 uidA（+），其余檢測目標均為陰性時，判為非致瀉性大腸埃希氏菌

VIC/HEX（uidA）

ROX（astA）

CY5（pic）

*astA、pic 基因可在細菌間轉移，當與其他毒力基因同時陽性時，astA、pic 基因不作為型別判定依據。如檢測 uidA、lt、astA 同時陽性，則判定該菌株為 ETEC；檢測 uidA、ipaH、pic 同時陽性，則判定該菌株為 EIEC。注意： EPEC/EHEC/EIEC/ETEC/EAEC 的結果判讀標準來源于 GB4789.6-2016。

5.3質控標準

陰性質控品：陰性對照 Ct 值>35 或無特異性擴增曲線； 陽性質控品：擴增曲線有明顯指數增長期，且 Ct 值≤32； 以上條件應同時滿足，否則實驗視為無效。

6.檢測方法的局限性

1.樣本檢測結果與樣本收集、處理、運送以及保存質量有關；

2.樣本提取過程中沒有控制好交叉污染，會出現假陽性結果；

3.陽性對照、擴增產物泄漏，會導致假陽性結果；

4.病原體在流行過程中基因突變、重組，會導致假陰性結果；

5.不同的提取方法存在提取效率差異，會導致假陰性結果；

6.試劑運輸，保存不當或試劑配制不準確引起的試劑檢測效能下降，出現假陰性或定量檢測不準確的結果；

7.本檢測結果僅供參考，如須確診請結合臨床癥狀以及其他檢。

注意事項：

1.所有操作嚴格按照說明書進行；

2.試劑盒內各種組分使用前應自然融化，完-全混勻并短暫離心；

3.反應液應避光保存；

4.反應中盡量避免氣泡存在，管蓋需蓋緊；

5.使用一次性吸頭、一次性手套和各區專用工作服；

6.樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區進行，以免交叉污染；

7.實驗完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺和移液器；

8.試劑盒里所有物品應視為污染物對待，并按照《微生物生物醫學實驗室生物安全通則》進行處理。

9.本產品僅供科研。

選擇我們的五種致瀉性大腸埃希氏菌PCR檢測試劑盒，就是選擇精準、高效、可靠的檢測方案，為您的科研實驗保駕護航！