BL6003 Na+K+- ATP 酶活性測定 氧化磷酸化
- 公司名稱 北京諾博萊德科技有限公司
- 品牌 NobleRyder/諾博萊德
- 型號 BL6003
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時間 2025/4/2 17:25:43
- 訪問次數(shù) 74
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| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 50T/24S |
|---|---|---|---|
| 貨號 | BL6003 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,制藥/生物制藥 |
| 主要用途 | 可催化ATP 水解生成ADP 和無機磷 |
Na+K+- ATP 酶活性測定說明書
分光光度法 50 管/24 樣
Na+K+- ATP 酶活性測定 氧化磷酸化
正式測定前務(wù)必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定測定意義：
Na+K+- ATP 酶廣泛分布于植物、動物、微生物和細胞中，可催化ATP 水解生成ADP 和無機磷。
測定原理：
Na+K+-ATP 酶分解ATP 生成ADP 及無機磷，通過測定無機磷的量來確定ATP 酶活性。
試劑的組成和配制：
產(chǎn)品名稱 | BL6003-50T/24S | Storage |
提取液：液體 | 50ml | 4℃ |
試劑一：液體 | 10ml | 4℃ |
試劑二：液體 | 5ml | 4℃ |
試劑三：液體 | 5ml | 4℃ |
試劑四：粉劑 | 1 支×3 | -20℃ |
試劑五：液體 | 5ml | 4℃ |
試劑六：粉劑 | 1 瓶 | 4℃ |
試劑七：粉劑 | 1 瓶 | 4℃ |
試劑八：粉劑 | 1 瓶 | 4℃ |
試劑九：液體 | 25ml | 室溫 |
試劑十：10mmol/L 標準磷貯備 液 | 10ml | 4℃ |
說明書 | 一份 | |
試劑四：粉劑×3 支，-20℃保存。用時每支加 1ml 蒸餾水；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融；
試劑七：粉劑×1 瓶, 4℃保存。用時加入 25ml 蒸餾水，溶解后 4℃保存一周；試劑八：粉劑×1 瓶, 4℃保存。用時加入 25ml 蒸餾水，溶解后 4℃保存一周；
0.5μmol/ml 標準磷應(yīng)用液配制：將貯備液 20 倍稀釋，即取 0.1ml 試劑十加 1.9ml 蒸餾水充分混勻。
定磷劑的配制：按 H2O: 試劑七:試劑八:試劑九=2:1:1:1 的比例配制，配好的定磷劑應(yīng)為淺黃色。若無色則試劑失效，若是藍色則為磷污染，定磷劑現(xiàn)用現(xiàn)配。
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計、臺式離心機、可調(diào)式移液器、1 ml 玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
樣品酶液的制備：
1、細菌、細胞或組織樣品的制備：
細菌或培養(yǎng)細胞：先收集細菌或細胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細菌或細胞數(shù)量（104 個）：提取液體積（ml）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細菌或細胞加入 1ml 提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復 30 次）；8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。
組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1ml 提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。
2、血清（漿）樣品：直接檢測。
操作步驟:
1、分光光度計預熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 660nm，蒸餾水調(diào)零。
2、酶促反應(yīng)（在EP 管中加入下列試劑）：
對照管 | 測定管 | |
試劑一（μl） | 130 | 90 |
試劑二（μl） | 40 | 40 |
試劑三（μl） | 40 | 40 |
試劑四（μl） | 40 | 40 |
試劑五（μl） | 40 | |
樣本 （μl） | 200 |
混勻，37℃（哺乳動物）或 25℃（其他物種）準確水浴 10min;
試劑六（μl） | 50 | 50 |
樣本 （μl） | 200 |
混勻，8000g，25℃離心 10min，取上清液; 3、定磷(在 1.5mlEP 管中依次加入下列試劑)
空白管 | 標準管 | 對照管 | 測定管 | |
0.5μmol/ml 標準磷應(yīng)用液 （μl） | 100 | |||
上清液（μl） | 100 | 100 | ||
蒸餾水（μl） | 100 | |||
定磷試劑（μl） | 1000 | 1000 | 1000 | 1000 |
混勻，室溫放置 30 min，在 660nm 處比色。
注意:
1、由于每一個樣都必須做對照，本試劑盒 50 管保證測 24 份Na+K+-ATP 酶。
2、此法具有微量、靈敏、快速的特點。所以對測定所用試管要求嚴格無磷。
3、空白管和標準管只要做一管。
計算:
1、血清（漿）Na+K+- ATPase 活力的計算:
定義：每小時每毫升血清（漿）中Na+K+- ATP 酶分解ATP 產(chǎn)生 1μmol 無機磷的量為一個酶活力單位。
Na+K+-ATP 酶活力（μmol/h/ml）=[C 標準管×V 總]×（A 測定管-A 對照管）÷（A 標準管-A 空白管）÷V 樣÷T=7.5×（A 測定管-A 對照管）÷（A 標準管-A 空白管）
2、組織、細菌或細胞中Na+K+- ATPase 活力的計算：
按蛋白濃度計算：
定義：每小時每毫克組織蛋白中 Na+K+- ATP 酶分解ATP 產(chǎn)生 1μmol 無機磷的量為一個酶活力單位。
Na+K+-ATP 酶活力(μmol/h /mg)= [C 標準管×V 總]×（A 測定管-A 對照管）÷（A 標準管-A 空白管）÷（Cpr×V 樣）÷T =7.5×（A 測定管-A 對照管）÷（A 標準管-A 空白管）÷Cpr
按樣本鮮重計算：
定義：每小時每克組織中Na+K+-ATP 酶分解ATP 產(chǎn)生 1μmol 無機磷的量為一個酶活力單位。
Na+K+-ATP 酶活力(μmol/h/g)= [C 標準管×V 總]×（A 測定管-A 對照管）÷（A 標準管-A 空白管）÷(W× V 樣÷V 樣總)÷T=7.5×（A 測定管-A 對照管）÷（A 標準管-A 空白管）÷W
按細菌或細胞密度計算：
定義：每小時每 1 萬個細菌或細胞中Na+K+-ATP 酶分解ATP 產(chǎn)生 1μmol 無機磷的量為一個酶活力單位。
Na+K+-ATP 酶活力(μmol/h /104)= [C標準管×V總]×（A 測定管-A 對照管）÷（A 標準管-A 空白管）÷(500×V樣÷V 樣總)÷T=0.015×（A 測定管-A 對照管）÷（A 標準管-A 空白管）
C 標準管：標準管濃度，0.5μmol/ml；V 總：酶促反應(yīng)總體積，0.5ml；V 樣：加入樣本體積，0.2ml ； V 樣總：加入提取液體積，1ml；T：反應(yīng)時間，1/6 小時；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本鮮重， g；500：細菌或細胞總數(shù)，500 萬。
Na+K+- ATP 酶活性測定 氧化磷酸化
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