BI6051 中性木聚糖酶測定試劑盒 糖代謝
- 公司名稱 北京諾博萊德科技有限公司
- 品牌 NobleRyder/諾博萊德
- 型號 BI6051
- 產地 北京
- 廠商性質 生產廠家
- 更新時間 2025/4/1 15:46:19
- 訪問次數 15
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| 供貨周期 | 現貨 | 規格 | 100T/48S |
|---|---|---|---|
| 貨號 | BI6051 | 應用領域 | 環保,化工,生物產業,農林牧漁,制藥/生物制藥 |
| 主要用途 | 能催化水解木聚糖,也被稱為戊聚糖酶或半纖維素酶 |
中性木聚糖酶（Neutral Xylanase，NEX）測定試劑盒說明書
微量法 100 管/48 樣
中性木聚糖酶測定試劑盒 糖代謝
正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定測定意義：
木聚糖酶(EC 3.2.1.8)主要由微生物產生，能催化水解木聚糖，也被稱為戊聚糖酶或半纖維素酶，可分解釀造或飼料工業中的原料細胞壁以及β-葡聚糖，降低釀造中物料的粘度，促進有效物質的釋放，以及降低飼料中的非淀粉多糖，促進營養物質的吸收利用，因而廣泛的應用于釀造和飼料工業中，NEX 一般分離自最適生長pH 為 6-8 的微生物。
測定原理：
NEX 在中性環境中催化木聚糖降解成還原性寡糖和單糖，在沸水浴條件下進一步與 3,5-二硝基水楊中發生顯色反應，在 540nm 處有特征吸收峰，反應液顏色的深淺與酶解產生的還原糖量成正比，通過測定反應液在 540nm 吸光值增加速率，可計算NEX 活力。
組成：
產品名稱 | BI6051-100T/48S | Storage |
緩沖液：液體 | 65ml | 4℃ |
試劑一：液體 | 10ml | 4℃避光 |
試劑二：液體 | 10ml | 4℃避光 |
說明書 | 一份 | |
試劑一：液體 10ml×1 瓶，4℃避光保存。（若出現白色絮狀或顆粒狀沉淀，可 60℃加熱溶解后使用）。
自備儀器和用品：
天平、低溫離心機、恒溫水浴鍋，可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96 孔板和蒸餾水。
粗酶提取：
發酵液：發酵液于 8000g，4℃，離心 15min，取上清，作為待測樣品。
酶干粉：稱約 0.1mg，加 1ml 緩沖液溶解待測。
組織樣本：按照組織質量（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1ml緩沖液）進行冰浴勻漿，然后 8000g，4℃，離心 10min，取上清待測。
測定操作表：
1、分光光度計/酶標儀預熱 30min，調節波長至 540nm。
2、操作表
對照管 | 測定管 | |
樣品（μl） | 60 | 60 |
緩沖液（μl） | 90 | 90 |
試劑一（μl） | 60 | |
試劑二（μl） | 90 | |
混勻，蓋緊瓶蓋，50℃水浴，反應 30min，立即沸水浴 20min 滅活。(注意不要讓蓋子爆 開，以免進水，改變了反應體系) | ||
試劑一（μl） | 60 | |
試劑二（μl） | 90 | |
混勻，沸水浴顯色 5min，取 200µL 于微量石英比色皿/96 孔板中 540nm 處測定吸光值A， 計算ΔA=A 測定管-A 對照管。每個測定管設一個對照管。 | ||
NEX 計算公式：
用微量石英比色皿測定的計算公式如下
標準曲線：y = 1.6904x + 0.0058，R2 = 0.9989
按液體體積活力計算：
酶活定義：50℃，pH6.0 條件下，每毫升液體樣本每分鐘分解木聚糖產生 1nmol 還原糖所需的酶量為一個中性木聚糖酶的活力單位。
NEX 活力（nmol/min/ml）= （ΔA-0.0058）÷1.6904÷150÷T×稀釋倍數×106
= 657× (ΔA-0.0058)
按蛋白濃度計算：
酶活定義：50℃，pH6.0 條件下，每毫克蛋白每分鐘分解木聚糖產生 1nmol 還原糖所需的酶量為一個中性木聚糖酶的活力單位。
NEX 活力（nmol/min/mg prot）= （ΔA -0.0058）÷1.6904÷150÷T×稀釋倍數×106÷Cpr
= 657×(ΔA -0.0058 ) ÷Cpr
按鮮重計算：
酶活定義：50℃，pH6.0 條件下，每克樣本每分鐘分解木聚糖產生 1nmol 還原糖所需的酶量為一個中性木聚糖酶的活力單位。
NEX 活力（nmol/min/g 鮮重）= （ΔA -0.0058）÷1.6904÷150÷T×稀釋倍數×106÷W
= 657×(ΔA -0.0058 ) ÷W
150：木糖的分子量；T：反應時間，30min；稀釋倍數=V 反總÷V 樣=300µL÷60µL=5；
106：轉化因子，即 1mg/ml=106ng/ml；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/ml；W：樣本質量，g。
用 96 孔板測定的計算公式如下
標準曲線：y = 0.8452x + 0.0058，R2 = 0.9989
按液體體積活力計算：
酶活定義：50℃，pH6.0 條件下，每毫升液體樣本每分鐘分解木聚糖產生 1nmol 還原糖所需的酶量為一個中性木聚糖酶的活力單位。
NEX 活力（nmol/min/ml）= （ΔA-0.0058）÷0.8452÷150÷T×稀釋倍數×106
= 1315× (ΔA-0.0058)
按蛋白濃度計算：
酶活定義：50℃，pH6.0 條件下，每毫克蛋白每分鐘分解木聚糖產生 1nmol 還原糖所需的酶量為一個中性木聚糖酶的活力單位。
NEX 活力（nmol/min/mg prot）= （ΔA -0.0058）÷0.8452÷150÷T×稀釋倍數×106÷Cpr
= 1315×(ΔA -0.0058 ) ÷Cpr
按鮮重計算：
酶活定義：50℃，pH6.0 條件下，每克樣本每分鐘分解木聚糖產生 1nmol 還原糖所需的酶量為一個中性木聚糖酶的活力單位。
NEX 活力（nmol/min/g 鮮重）= （ΔA -0.0058）÷0.8452÷150÷T×稀釋倍數×106÷W
= 1315×(ΔA -0.0058 ) ÷W
150：木糖的分子量；T：反應時間，30min；稀釋倍數=V 反總÷V 樣=300µL÷60µL=5；
106：轉化因子，即 1mg/ml=106ng/ml；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/ml；W：樣本質量，g。
注意事項：
吸光度變化應該控制在 0.01~0.8 之間，否則加大樣品量或稀釋樣品，注意計算公式中參與計算的稀釋倍數要相應改變；也可以延長或者縮短反應時間。
試劑盒 2-8℃保存，保質期 3 個月，建議盡快使用。
中性木聚糖酶測定試劑盒 糖代謝
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