纖維素酶（cellulase，CL）/羧甲基纖維素酶活性測定試劑盒說明書

微量法 100 管/48 樣

纖維素酶/羧甲基活性測定試劑盒 糖代謝

正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定測定意義：

CL（EC 3.2.1.4）存在于細菌、真菌和動物體內，能夠催化羧甲基纖維素降解，是一類可廣泛應用于醫藥、食品、棉紡、環保及可再生資源利用等領域的酶制劑。

測定原理：

采用蒽酮比色法測定CL催化羧甲基纖維素鈉降解產生的還原糖的含量。

組成：

試劑三：粉劑×1 瓶，4℃保存； 臨用前加入 5ml 蒸餾水和 45ml 濃硫酸充分溶解待用。

自備儀器和用品：

可見分光光度計/酶標儀、水浴鍋、移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研缽、冰、濃硫酸和蒸餾水。

樣品測定的準備：

1、細菌或培養細胞：先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照細菌或細胞數量（104 個）：提取液體積（ml）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細菌或細胞加入 1ml 提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復 30 次）；8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。

2、組織：按照組織質量（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1ml 提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。

3、血清（漿）樣品：直接檢測。

加樣表和測定步驟：

37℃振蕩反應 1h 后，90℃水浴 15min（蓋緊，防止水分散失），冷卻后

8000g 25℃離心 10min，取上清，得糖化液

混勻， 90℃水浴 10min（蓋緊，防止水分散失），冷卻，取 200μl 至微量石英比色皿或 96 孔板中，測 620nm 下吸光值A，計算ΔA=A 測定管-A 對照管。每個測定管設一個對照管。

CL 活力計算：

用微量石英比色皿測定的計算公式如下

1、標準條件下測定的回歸方程為 y = 5.018x - 0.0462；x 為標準品濃度（mg/ml），y 為吸光值。

2、血清（漿）CL 活力的計算

單位的定義：每ml 血清（漿）每分鐘催化產生 1μg 葡萄糖定義為一個酶活力單位。

CL 活力(μg /min/ml)= [1000×(ΔA+0.0462) ÷5.018×V 反總]÷V 樣÷T =39.8×(ΔA+0.0462)

3、細胞、細菌和組織中 CL 活力的計算

按照蛋白濃度計算

單位的定義：每mg 組織蛋白每分鐘催化產生 1μg 葡萄糖定義為一個酶活力單位。

CL 活力(μg /min/mg prot)=[1000×(ΔA+0.0462) ÷5.018×V 反總]÷(V 樣×Cpr) ÷T

=39.8×(ΔA+0.0462) ÷Cpr

按樣本鮮重計算

單位的定義：每g 組織每分鐘催化產生 1μg 葡萄糖定義為一個酶活力單位。

CL 活力(μg /min /g 鮮重)=[1000×(ΔA+0.0462) ÷5.018×V 反總]÷(W× V 樣÷V 樣總) ÷T

=39.8×(ΔA+0.0462) ÷W

按細菌或細胞密度計算

單位的定義：每 1 萬個細菌或細胞每分鐘催化產生 1μg 葡萄糖定義為一個酶活力單位。

CL 活力(μg /min /104 cell)=[1000×(ΔA+0.0462) ÷5.018×V 反總]÷(500×V 樣÷V 樣總) ÷T

=0.0796×(ΔA+0.0462)

1000：1mg/ml=1000ug/ml；V 反總：反應體系總體積，0.6ml； V 樣：加入樣本體積，0.05 ml；V 樣總：加入提取液體積，1 ml；T：反應時間，60 min；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/ml；W：樣本質量，g；500：細菌或細胞總數，500 萬。

用 96 孔板測定的計算公式如下

1、標準條件測定回歸方程為 y = 2.5090x - 0.0462；x 為標準品濃度（mg/ml），y 為吸光值。

2、血清（漿）CL 活力的計算

單位的定義：每ml 血清（漿）每分鐘催化產生 1μg 葡萄糖定義為一個酶活力單位。

CL 活力(μg /min/ml)= [1000×(ΔA+0.0462) ÷2.509×V 反總]÷V 樣÷T =79.6×(ΔA+0.0462)

3、細胞、細菌和組織中 CL 活力的計算

按照蛋白濃度計算

單位的定義：每mg 組織蛋白每分鐘催化產生 1μg 葡萄糖定義為一個酶活力單位。

CL 活力(μg /min /mg prot)=[1000×(ΔA+0.0462)÷2.509×V 反總]÷(V 樣×Cpr)÷T

=79.6×(ΔA+0.0462) ÷Cpr

按樣本鮮重計算

單位的定義：每g 組織每分鐘催化產生 1μg 葡萄糖定義為一個酶活力單位。

CL 活力(μg /min /g 鮮重)=[1000×(ΔA+0.0462)÷2.509×V 反總]÷(W× V 樣÷V 樣總)÷T

=79.6×(ΔA+0.0462)÷W

按細菌或細胞密度計算

單位的定義：每 1 萬個細菌或細胞每分鐘催化產生 1μg 葡萄糖定義為一個酶活力單位。

CL 活力(μg /min /104cell)=[1000×(ΔA+0.0462)÷2.509×V 反總]÷(500×V 樣÷V 樣總)÷T

=0.1592×(ΔA+0.0462)

1000：1mg/ml=1000ug/ml；V 反總：反應體系總體積，0.6ml； V 樣：加入樣本體積，0.05 ml；V 樣總：加入提取液體積，1 ml；T：反應時間，60 min；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/ml；W：樣本質量，g；500：細菌或細胞總數，500 萬。

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