苯bing氨酸解氨酶（Phenylalnine ammonialyase，PAL）試劑盒說(shuō)明書(shū)

分光光度法 50 管/48 樣

苯bing氨酸解氨酶試劑盒 抗逆

正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定測(cè)定意義：

PAL（EC4. 3 1 5）廣泛存在于各種植物和少數(shù)微生物中，是植物體內(nèi)苯bing烷類代謝的關(guān)鍵酶，與一些重要的次生物質(zhì)如木質(zhì)素、異黃酮類植保素、黃酮類色素等合成密切相關(guān)，在植物正常生長(zhǎng)發(fā)育和抵御病菌侵害過(guò)程中起重要作用。

測(cè)定原理：

PAL 催化L-苯bing氨酸裂解為反式肉桂酸和氨，反式肉桂酸在 290nm 處有最大吸收值，通過(guò)測(cè)定吸光值升高速率計(jì)算PAL 活性。

組成：

試劑二：粉劑×3 瓶，4℃保存。臨用前每瓶加入 4ml 蒸餾水水充分溶解待用；用不完的試劑 4℃保存；

自備儀器和用品：

紫外分光光度計(jì)、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1 ml 石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

粗酶液提取：

按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1ml 提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。10000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。

測(cè)定步驟：

混勻，30℃ 準(zhǔn)確水浴30min

混勻，靜置 10min 后，290nm 處記錄測(cè)定管吸光值 A1 和對(duì)照管吸光值A2，△A=A1-A2。注意：對(duì)照管只要做一管

PAL 活性計(jì)算：

（1）  按蛋白濃度計(jì)算

單位定義：每mg 組織蛋白在每ml 反應(yīng)體系中每min 使 290nm 下吸光值變化 0.1 為一個(gè)酶活性單位。

PAL（U/mg prot）=ΔA×V 反總÷（Cpr× V 樣）÷0.1÷T =17.3×ΔA÷Cpr

（2）  按樣本鮮重計(jì)算

單位定義：每g 組織每ml 反應(yīng)體系中每min 使 290nm 下吸光值變化 0.1 為一個(gè)酶活性單位。

PAL（U/g 鮮重）＝ΔA×V 反總÷(W× V 樣÷V 樣總)÷0.1÷T =17.3×ΔA÷W

V 反總：反應(yīng)體系總體積，1.04ml； V 樣：加入樣本體積，0.02ml；V 樣總：加入提取液體積，1 ml；T：反應(yīng)時(shí)間，30 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g；

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