抗體人源化服務(wù)
非人源性抗體進(jìn)入人體內(nèi)會(huì)引起機(jī)體嚴(yán)重的排異反應(yīng)，例如鼠源單克隆抗體進(jìn)入人體會(huì)產(chǎn)生人抗鼠抗體反應(yīng) (Human anti-mouse antibody response, HAMA response)，進(jìn)而影響抗體在臨床應(yīng)用時(shí)的安全性和治療效果。抗體人源化是將動(dòng)物源抗體通過(guò)基因工程操作及重組表達(dá)，使抗體的大部分序列或者全部序列變成人源的序列，在抗體親和力和特異性的基礎(chǔ)上，更大程度上降低抗體的免疫原性。義翹神州利用CDR置換技術(shù)及計(jì)算機(jī)輔助結(jié)構(gòu)模擬設(shè)計(jì)可對(duì)羊駝納米抗體、鼠源單抗進(jìn)行人源化改造，人源化程度 >95%，為客戶提供優(yōu)質(zhì)的單克隆抗體人源化服務(wù)。
服務(wù)特色
抗體人源化服務(wù)內(nèi)容
客戶提供
1. 親本抗體序列。
2. 抗原蛋白：純度>90%，濃度>1mg/mL, 緩沖液為PBS或其他經(jīng)義翹評(píng)估對(duì)檢測(cè)無(wú)影響的。
抗體人源化服務(wù)流程
抗體人源化服務(wù)案例
鼠源單克隆抗體人源化服務(wù)案例
如下圖所示，經(jīng)過(guò)人源化改造的抗體，親和力和親本單抗相當(dāng)。
| Affinity kinetic analysis |
| Sample | KD(M) | Kon(1/Ms) | Kdis(1/s) | Full R^2 |
| Parental mouse Ab | 1.74E-10 | 3.30E+05 | 5.74E-05 | 0.9963 |
| Humanizied clone 1 | 2.83E-11 | 1.73E+05 | 4.89E-06 | 0.999 |
| Humanizied clone 2 | 4.31E-11 | 2.16E+05 | 9.30E-06 | 0.998 |
| Humanizied clone 3 | 4.85E-11 | 2.17E+05 | 1.05E-05 | 0.9982 |
納米抗體人源化服務(wù)案例
納米抗體經(jīng)人源化改造后，親和力較親本抗體相當(dāng)。
| Affinity kinetic analysis |
| Sample | KD(M) | Ka(1/Ms) | Kd(1/s) . |
| Parental VHH | 1.04E-08 | 1.33E+05 | 0.001379 |
| Humanized VHH 1 | 9.72E-09 | 1.14E+05 | 0.001104 |
| Humanized VHH 2 | 8.30E-09 | 1. .29E+05 | 0.001072 |
| Humanized VHH 3 | 9.26E-09 | 1.05E+05 | 0.000972 |
抗體人源化服務(wù)常見(jiàn)問(wèn)題解答
如何避免抗體人源化后親和力下降？ 在人源化程度的同時(shí)注意對(duì)抗體構(gòu)象起到穩(wěn)定作用的氨基酸殘基的保留。同時(shí)義翹神州可提供親和力成熟服務(wù)，利用人工智能（AI）驅(qū)動(dòng)的抗體親和力成熟平臺(tái)和高通量重組抗體表達(dá)平臺(tái)，可以快速且高-效地進(jìn)行篩選。經(jīng)篩選和驗(yàn)證，抗體親和力可提升103倍。
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什么是抗體人源化？ 自單克隆抗體發(fā)布以來(lái)，鼠源性的單抗在臨床及治療上發(fā)揮了巨大的作用。但鼠源抗體對(duì)人而言有較強(qiáng)的免疫反應(yīng)，會(huì)產(chǎn)生人抗鼠抗體反應(yīng)（Human anti-mouse antibody response, HAMA response），影響鼠源單抗在臨床上應(yīng)用的安全性及治療效果。而為了解決這個(gè)問(wèn)題，我們通過(guò)基因改造，使鼠源抗體具有與人體內(nèi)抗體類似的結(jié)構(gòu)，從而逃避免疫系統(tǒng)的識(shí)別，避免誘導(dǎo)HAMA反應(yīng)，這個(gè)過(guò)程我們稱之為抗體人源化。
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人源化抗體的篩選基于哪些評(píng)估準(zhǔn)則？ 1、哺乳細(xì)胞蛋白表達(dá)系統(tǒng)（HEK293或CHO）進(jìn)行瞬時(shí)表達(dá)的表達(dá)水平。 2、基于檢測(cè)指標(biāo)EC50（通過(guò)ELISA或FACS檢測(cè)）或Kd（通過(guò)Biacore或Octet檢測(cè)），將人源化抗體結(jié)合力與鼠源抗體和嵌合抗體結(jié)合力進(jìn)行對(duì)比。 3、基于體外生物活性測(cè)試，將人源化抗體活性與鼠源抗體和嵌合抗體活性進(jìn)行對(duì)比。 4、基于體外結(jié)合試驗(yàn)，檢測(cè)人源化抗體與相關(guān)同源物種的交叉反應(yīng)性。 5、基于生物物理性質(zhì)分析，將人源化抗體與鼠源抗體和嵌合抗體進(jìn)行對(duì)比。
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95%的人源化程度，是指可變區(qū)的人源化程度，還是包括恒定區(qū)的全長(zhǎng)抗體人源化程度？ 95%的人源化程度，是指可變區(qū)的人源化程度，其抗體恒定區(qū)本來(lái)就是人源的。義翹神州利用CDR置換技術(shù)及計(jì)算機(jī)輔助結(jié)構(gòu)模擬設(shè)計(jì)可對(duì)鼠源單抗等進(jìn)行人源化改造，人源化程度 >95%，可提供PTM和聚集性預(yù)測(cè)報(bào)告，為客戶提供優(yōu)質(zhì)的單克隆抗體人源化服務(wù)。
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人源化步驟里，回復(fù)突變具體做了什么工作？ 在3D結(jié)構(gòu)建模后需確定關(guān)鍵氨基酸殘基，回復(fù)突變是將影響構(gòu)象、或與抗原結(jié)合的氨基酸突變回鼠源氨基酸。
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影響人源化抗體表達(dá)量降低的因素有哪些？要注意哪些設(shè)計(jì)？ 人源化抗體表達(dá)量降低一般是抗體形成了聚集，需要注意對(duì)疏水氨基酸的改造。
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