親和力是評價可逆反應過程中兩個分子間相互作用強弱的特征參數，是了解分子以及識別生物學過程、藥物的發現與篩選等的重要指標。蛋白質相互作用/親和力檢測可應用于藥物早期研究開發、篩選鑒定、臨床前與臨床研究以及下游生產質控等各個環節，而且在生命科學基礎研究、生物制藥開發等領域也有應用。業內常用的檢測技術有表面等離子共振（Surface plasmon resonance, SPR）和生物膜干涉技術（Bio-Layer Interferometry, BLI）。

義翹神州擁有豐富和高質量的蛋白資源，如Fc受體蛋白、免疫檢查點蛋白等，可提供利用BLI技術（Octet儀器）和SPR技術（Biacore儀器）為客戶提供高質量一體化的分子互作檢測服務，包括抗體篩選、活性檢測、表位作圖、一致性評價和質量控制檢測服務。

Biacore/Octet親和力檢測服務范圍

SPR/BLI親和力檢測平臺

義翹神州基于Biacore平臺與ForteBio Octet 平臺為客戶提供快速準確的親和力測定服務，與其他互作分析技術相比，如ELISA、免疫共沉淀、酵母雙雜交，有著實時、無標記、可檢測低親和的顯著優-勢，能夠實現對分子間親和力的準確檢測。

我們的優勢與能力

豐富的蛋白產品支持（FcRn，FcγR， 靶點蛋白等）
義翹神州擁有豐富的蛋白資源，全面覆蓋Fc受體蛋白、免疫檢查點蛋白、細胞因子、蛋白酶和SARS-CoV-2病毒蛋白等，為您提供高質量一體化的分子互作檢測服務。

服務內容

客戶提供

1. 樣品類型、濃度、分子量、種屬、標簽等信息
2. SPR：1）分析物樣品中不含有甘油、蔗糖、咪唑等高折光的成分；2）氨基偶聯的配體溶液中不含有tris、NaN3等成分；3）小分子需要明確有機溶劑信息
    BLI： 1）分析物樣品中不含有高濃度的高聚物物質，如PEG等；2）氨基偶聯的配體溶液中不含有tris、NaN3等成分

案例分享

義翹神州擁有7000+優質的靶點蛋白，如Fc受體蛋白、免疫檢查點蛋白等，檢測中心獲得CNAS資質，可提供抗體篩選、表征和Fc受體檢測等，助力抗體藥IND申報。

抗體與Fc受體蛋白親和力測定

• Fc受體蛋白與抗體親和力測定（BLI）

抗體與補體親和力測定

• 抗體與補體親和力測定（BLI）

人抗體IgG1與補體C1q結合，親和力測定結果為2.58×10-8 M（BLI）。

生物大分子間相互作用

• 生物大分子間相互作用（SPR/BLI）

一致性評價

• 一致性評價（SPR）

抗體篩選

• 抗體篩選（SPR）

以下Biacore實驗，篩選針對靶標3個細胞上清，目的是得到可高表達、與靶標高親和抗體的細胞株，從以下篩選數據判斷，127號細胞株符合要求。

SPR/BLI親和力測定服務常見問題解答

• SPR與BLI之間有哪些差異以及各自的優點、缺點是什么？

抗原與抗體的親和力測定在藥物的發現與篩選、藥效評價等階段是一項重要工作。親和力是評價可逆反應過程中兩個分子間相互作用強弱的特征參數，是了解分子以及識別生物學過程、藥物的發現與篩選等的重要指標。
SPR和BLI技術作為表征生物分子相互作用動力學的兩種技術，一直占據主導地位。SPR和BLI在親和力檢測中各具優-勢，其均可以獲得親和力準確數值以及相應的動力學數據，SPR 具有比BLI 更長的歷史，具有更-高的靈敏度，在分辨方面更好；但SPR所需儀器維護較多，實驗結束后的樣品不可回收。BLI可以提供更-高的通量和更短實驗周期，但溫度控制范圍有限且實驗過程中面臨樣品蒸發的挑戰。更多內容詳見下表。
如果您有興趣使用義翹神州SPR/BLI分子互作服務來支持您的研究發現，您可以通過以下方式進行咨詢。

• Biacore檢測過程中，如果為病毒樣本，儀器需要消毒嗎？如何做清洗？

每次檢測完病毒樣本后均需要對儀器至少進行Desorb清洗，除去管路中殘留的樣品，同時進行sanitize清洗除菌，防止管路中微生物生長阻塞管路對儀器造成損壞。

• 親和力分析一般選擇哪種緩沖液？對蛋白緩沖液有什么要求？

親和力分析常用的緩沖液為PBS或者HBS；使用NTA傳感器時緩沖液中不得含有EDTA；使用AR2G /CM5傳感器時配體蛋白緩沖液中不得含有其他氨基物質，如tris；使用APS 傳感器時緩沖液中不得含有任何去污劑。

• 小分子化合物可以做親和力檢測嗎？如果進行親和力檢測，需要用DMSO溶解嗎？

小分子化合物可以做親和力檢測，需不需要使用DMSO溶解，取決于小分子本身的溶解性質。如果需要DMSO才能溶解，那么在SPR親和力分析時需要進行溶劑校正。

義翹神州同時擁有兩種平臺（SPR和BLI），可提供包括蛋白、抗體、DNA/RNA、脂類、多糖、多肽、小分子化合物、病毒、細胞、細菌、納米材料等多樣品類型的高通量親和力檢測。根據客戶檢測需求，可選擇單一平臺或兩種平臺進行活性驗證，助力您完成研發項目。

• 穩態分析一般親和力會相對較弱嗎？

穩態分析只是一種擬合方式，適用于快結合快解離的結合方式，與親和力大小無關。無論是快結合快解離，還是慢結合慢解離，只是不同的動力學方式，有可能具有相同的親和力。

• 使用BLI技術測定親和力過程中出現非特異性結合時，要如何解決呢？

非特異性結合是親和力檢測過程中經常遇到的問題。使用BLI技術（Octet設備）測定親和力出現非特異性結合時，解決方法為：
1）除添加牛血清白蛋白（BSA）外，建議在分析物緩沖液中加入0.02% Tween-20， 以去除疏水作用所導致的非特異性吸附；
2) 將具有非特異性的物質固化在傳感器上；
3) 適當降低分析物的濃度；
4) 更換傳感器，比如從SA傳感器或者Capture類的傳感器變成APS傳感器或者 SSA 傳感器。
5) 更換或調整緩沖液。

• 使用SPR技術測定親和力過程中出現非特異性結合時，要如何解決呢？

使用SPR技術（Biacore設備）測定親和力出現非特異性結合時，不同情況及解決方法如下：
1） 與參比通道的非特異性結合---向分析物溶液中添加可溶性的葡聚糖，以競爭性抑制與傳感芯片表面上葡聚糖的非特異性結合。
2） 與配體分子的非特異性結合---該種非特異不在參比通道上產生響應值，但通常表現為與配體通道的非飽和結合。若混合樣品中含有如細胞裂解物或血清中的非分析物組分，則也可能與配體結合，盡量減少這類結合的一般原則是在樣品和運行緩沖液中使用生理水平或更-高的離子強度，而且如果表面活性劑不影響親和力分析，則應添加表面活性劑，如果上述措施沒效果，則應更換其它配體。
有時分析物會無選擇地結合到配體上（例如，許多低分子量化合物以低親和力結合到血清白蛋白上的多個位點，在表現上類似于非特異性結合），在該情況下，從相對低濃度的分析物樣品的傳感圖中有可能獲得關于高親和力結合位點的有用信息，因為低濃度時樣品中低親和力結合并不顯著，調整緩沖條件有助于降低無選擇性結合的影響。

• 如何使用Biacore檢測細胞或者病毒樣本（例如潛在的大顆粒樣本）？

以檢測細胞樣品為例：
細胞首先需要樣品前處理：①離心后棄上清；②加入PBS重復清洗3次樣品，細胞濾網過濾掉聚集的細胞，③加入醋酸鈉，將過濾后的細胞調整稀釋至合適的細胞密度，如：4E4 cell/mL。

• 如何使用Biacore儀器進行表位分析？

利用Biacore的抗原表位作圖方法進行分析，有兩種方法。
一種方法為配對檢測，在芯片表面固定一種抗體，將抗原結合到抗體上；然后流經第二種抗體時，檢測是否能夠同時結合到抗原上；
另一種方法為基于肽段抑制檢測的抗原表位作圖，某一抗原結構表位的肽段將直接抑制抗體與抗原上該表位的結合。

• 如何對帶有同樣融合標簽的兩個蛋白做親和力分析？

可以通過氨基偶聯直接固化其中一個蛋白，另外一個蛋白作為分析物進行檢測。也可以使用捕獲法，在固化完成后，使用帶有相同標簽的無關蛋白封閉傳感器。需要注意的是，封閉步驟要達到飽和，而且封閉需牢固，即封閉完成后的基線達到平穩狀態。在滿足封閉和穩定的情況下，就可以進行分析物的結合和解離。