NFAT報(bào)告基因-HEK293細(xì)胞系
- 公司名稱 武漢艾美捷科技有限公司
- 品牌 BPS Bioscience
- 型號(hào)
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 代理商
- 更新時(shí)間 2024/12/26 13:35:59
- 訪問次數(shù) 22
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武漢艾美捷科技有限公司（AmyJet Scientific Inc），簡(jiǎn)稱艾美捷科技（AmyJet Scientific）。2010年底成立于九省通衢的湖北省武漢市，歷經(jīng)五年多的發(fā)展，已成為國(guó)內(nèi)的集進(jìn)口試劑、實(shí)驗(yàn)室耗材銷售、技術(shù)服務(wù)與合約開發(fā)為一體的專業(yè)化高科技生物企業(yè)。艾美捷科技總部設(shè)在武漢市洪山區(qū)光谷大道35號(hào)光谷總部二期時(shí)代1號(hào)樓13層，業(yè)務(wù)覆蓋全國(guó)。
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艾美捷科技與國(guó)內(nèi)外優(yōu)秀的生物試劑供應(yīng)商保持著密切的合作關(guān)系，目前已成為眾多的中國(guó)總代理或一級(jí)代理，主要包括：Merck Millipore、Origene、AAT Bioquest、ABGENT、 Cayman Chemical、Abnova 、Biovision、ProSpec、Hycult Biotech 、Equitech-Bio、Trevigen、Alomone Labs、Epigentek、Abbkine、ImmunoReagents 、Jackson、SouthernBiotech、US Biological 、VIVA Bioscience 、Caisson Labs等，可以在*時(shí)間為用戶提供Z前沿的專業(yè)資訊、完備的產(chǎn)品及物流服務(wù)。
隨著公司業(yè)務(wù)的壯大，為了更好的服務(wù)客戶，公司組建了一支在生物領(lǐng)域經(jīng)驗(yàn)豐富的研發(fā)團(tuán)隊(duì)-艾美捷生物技術(shù)中心，宣布進(jìn)入自主研發(fā)階段，以期將更多更優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品*給國(guó)內(nèi)生物領(lǐng)域的同仁。相信在不久的將來，將陸續(xù)有印有艾美捷Logo的產(chǎn)品與大家見面，并逐漸受到大家的認(rèn)可！
專業(yè)的技術(shù)力量使我們能夠?yàn)閺V大用戶提供強(qiáng)大的技術(shù)支持，深厚的人脈資源使我們?cè)谌珖?guó)主要城市擁有眾多合作伙伴，艾美捷科技非常榮幸能將世界上*的生物產(chǎn)品*給國(guó)內(nèi)從事生物學(xué)領(lǐng)域科研的老師和同仁，配備的優(yōu)秀銷售隊(duì)伍以及專業(yè)的技術(shù)支持，隨時(shí)為客戶提供技術(shù)咨詢和售后服務(wù)。
作為專業(yè)性的產(chǎn)品供應(yīng)公司，公司出資儲(chǔ)備了大量現(xiàn)貨；作為產(chǎn)品研發(fā)公司，公司必將不遺余力，努力向?qū)I(yè)化、化標(biāo)準(zhǔn)邁進(jìn)，打造科技與服務(wù)并存型企業(yè)！
誠(chéng)摯邀請(qǐng)各位供應(yīng)商、經(jīng)銷商、老師們蒞臨艾美捷科技參觀、指導(dǎo)！
免疫分析試劑，標(biāo)簽及內(nèi)參抗體，特色二抗，蛋白純化產(chǎn)品和其它分子，細(xì)胞生物學(xué)試劑盒
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工,生物產(chǎn)業(yè) |
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蛋白激酶C (PKC)/鈣離子(Ca2+)響應(yīng)途徑會(huì)導(dǎo)致激活T細(xì)胞激活因子的核因子（NFAT）。NFAT由Ca2+和鈣離子/鈣調(diào)蛋白依賴的絲A酸磷酸酶鈣調(diào)磷酸酶調(diào)控。在靜息細(xì)胞中，NFAT蛋白被磷酸化并位于細(xì)胞質(zhì)中；受到刺激后，它們會(huì)被鈣調(diào)磷酸酶去磷酸化，轉(zhuǎn)移到細(xì)胞核，并誘導(dǎo)基因表達(dá)。
NFAT報(bào)告基因-HEK293細(xì)胞系包含一個(gè)在NFAT響應(yīng)元件控制下的螢火蟲熒光素酶基因，該基因被穩(wěn)定整合到HEK293細(xì)胞中。這個(gè)細(xì)胞系已經(jīng)驗(yàn)證了對(duì)佛波醇12-肉豆蔻酸酯13-乙酸酯（PMA）和伊諾莫辛的刺激反應(yīng)。
作為BPS Bioscience在中國(guó)的區(qū)域總代理，艾美捷科技強(qiáng)烈推薦BPS Bioscience熱銷產(chǎn)品NFAT 報(bào)告基因 - HEK293 細(xì)胞系 (PKC/Ca2+ 通路)。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。
| 產(chǎn)品名稱 | 貨號(hào) | 詳情 |
NFAT 報(bào)告基因 - HEK293 細(xì)胞系 (PKC/Ca2+ 通路) | BPS-79298 | 查看 |
應(yīng)用
? 監(jiān)測(cè)細(xì)胞內(nèi)鈣離子水平。
? 篩選PKC/Ca2+途徑的激活劑或抑制劑。
所需但未提供的材料
? PMA（LC Laboratories, #P1680）在DMSO中制備庫存溶液。
? 伊諾莫辛（Sigma, #I3909）在DMSO中制備庫存溶液。
? 檢測(cè)培養(yǎng)基：解凍培養(yǎng)基1（無遺傳霉素）
? 生長(zhǎng)培養(yǎng)基1B（BPS Cat. #79531）
? 96孔組織培養(yǎng)板或96孔組織培養(yǎng)處理的白色透明底部檢測(cè)板
? RO-31-8220（EMD Millipore, #557520）或其他PKC抑制劑
? 用于測(cè)量螢火蟲熒光素酶活性的ONE-Step熒光素酶檢測(cè)試劑（BPS Bioscience, #60690）。
? 熒光素酶檢測(cè)儀
A. NFAT報(bào)告基因-HEK293細(xì)胞對(duì)TCR交聯(lián)劑的反應(yīng)。
1. 在生長(zhǎng)培養(yǎng)基1B中收獲NFAT報(bào)告基因-HEK293細(xì)胞，并將細(xì)胞以每孔約30,000個(gè)細(xì)胞的密度播種到含有45 ?l檢測(cè)培養(yǎng)基的白色透明底部96孔微孔板中。
2. 將板在37°C的CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)過夜（約18-24小時(shí)）。
3. 將TCR交聯(lián)劑（PMA與伊諾莫辛）稀釋到檢測(cè)培養(yǎng)基中，達(dá)到所需最終濃度的10倍，并每孔加入5 ?l稀釋液。（我們建議從30 nM PMA和1 ?M伊諾莫辛的起始濃度開始。）最終DMSO濃度可高達(dá)0.5%。
向未刺激對(duì)照孔中加入相同濃度DMSO但不含交聯(lián)劑的5 ?l檢測(cè)培養(yǎng)基。
向無細(xì)胞對(duì)照孔中加入含DMSO的50 ?l檢測(cè)培養(yǎng)基（用于確定背景發(fā)光）。
每個(gè)處理至少設(shè)置三次重復(fù)。
4. 將細(xì)胞在37°C的CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)過夜（約18小時(shí)）。
5. 第二天，使用ONE-Step熒光素酶檢測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行熒光素酶檢測(cè)：
每孔加入50 ?l ONE-Step熒光素酶試劑，并在室溫下?lián)u動(dòng)約15分鐘。使用熒光素酶檢測(cè)儀測(cè)量發(fā)光。
6. 數(shù)據(jù)分析：從所有孔的發(fā)光讀數(shù)中減去平均背景發(fā)光（無細(xì)胞對(duì)照孔）。
NFAT熒光素酶報(bào)告基因表達(dá)的誘導(dǎo)倍數(shù) = 刺激孔的背景減去發(fā)光/未刺激對(duì)照孔的平均背景減去發(fā)光。
圖1. NFAT報(bào)告基因（熒光素酶）-HEK293細(xì)胞對(duì)TCR交聯(lián)劑伊諾莫辛與PMA的反應(yīng)。
B. NFAT報(bào)告基因-HEK293細(xì)胞對(duì)TCR交聯(lián)劑抑制劑的反應(yīng)。
1. 在生長(zhǎng)培養(yǎng)基1B中收獲NFAT報(bào)告基因-HEK293細(xì)胞，并將細(xì)胞以每孔約30,000個(gè)細(xì)胞的密度播種到含有45 ?l檢測(cè)培養(yǎng)基的白色透明底部96孔微孔板中。
2. 將板在37°C的CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)過夜（約18-24小時(shí)）。
3. 將抑制劑（RO-31-8220）稀釋到檢測(cè)培養(yǎng)基中，達(dá)到所需最終濃度的10倍，并每孔加入5 ?l稀釋液。最終DMSO濃度可高達(dá)0.5%。
向未抑制對(duì)照孔中加入相同濃度DMSO但不含抑制劑的5 ?l檢測(cè)培養(yǎng)基。
4. 將TCR交聯(lián)劑（PMA與伊諾莫辛）稀釋到檢測(cè)培養(yǎng)基中，達(dá)到所需最終濃度的10倍（我們建議從30 nM PMA和1 ?M伊諾莫辛的起始濃度開始）并每孔加入5 ?l稀釋液。最終DMSO濃度可高達(dá)0.5%。
向未刺激對(duì)照孔中加入相同濃度DMSO但不含交聯(lián)劑的5 ?l檢測(cè)培養(yǎng)基。
向無細(xì)胞對(duì)照孔中加入含DMSO的55 ?l檢測(cè)培養(yǎng)基（用于確定背景發(fā)光）。
每個(gè)處理至少設(shè)置三次重復(fù)。
5. 將細(xì)胞在37°C的CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)過夜（約18小時(shí)）。
第二天，使用ONE-Step熒光素酶檢測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行熒光素酶檢測(cè)：
每孔加入55 ?l One-Step熒光素酶試劑，并在室溫下?lián)u動(dòng)約15分鐘。使用熒光素酶檢測(cè)儀測(cè)量發(fā)光。
6. 數(shù)據(jù)分析：從所有孔的發(fā)光讀數(shù)中減去平均背景發(fā)光（無細(xì)胞對(duì)照孔）。
通過將每種條件除以刺激孔的背景減去發(fā)光來計(jì)算NFAT熒光素酶報(bào)告基因表達(dá)的百分比。在沒有RO-31-8220的情況下，用1 ?M伊諾莫辛和30 nM PMA刺激的細(xì)胞的背景減去發(fā)光被設(shè)為100%。
圖2. RO-31-8220抑制PKC在PMA和伊諾莫辛誘導(dǎo)的NFAT報(bào)告基因（熒光素酶）-HEK293細(xì)胞中的作用。
結(jié)果以發(fā)光百分比顯示。在沒有RO31-8220的情況下，用1 ?M伊諾莫辛和30 nM PMA刺激的細(xì)胞的背景減去發(fā)光被設(shè)為100%。
BPS Bioscience是一家通過ISO 9001:2015認(rèn)證的生命科學(xué)領(lǐng)域的供應(yīng)商，公司一直致力于開發(fā)藥物研發(fā)領(lǐng)域的重組蛋白酶、蛋白酶活性/抑制劑篩選試劑盒和慢病毒等工具。公司由Henry Zhu博士于2005年創(chuàng)立，從創(chuàng)立至今一直致力于提供藥物研發(fā)領(lǐng)域的創(chuàng)新解決方案，以推動(dòng)新的藥物發(fā)現(xiàn)。公司主要關(guān)注的領(lǐng)域包括免疫療法、表觀遺傳學(xué)、CRISPR、細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等，主要提供激酶、磷酸二酯酶、磷酸酶、組蛋白去甲基化酶、組蛋白甲基化轉(zhuǎn)移酶、HDACs、聚ADP核糖聚合酶等。
作為BPS Bioscience在中國(guó)的區(qū)域代理，艾美捷科技有限公司將為中國(guó)客戶提供全面的BPS Bioscience以及客戶訂制化服務(wù)。
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