產(chǎn)品特點(diǎn)

性能溫和 —— 在非變性條件下裂解細(xì)胞，不破壞蛋白間相互作用

強(qiáng)效保護(hù) —— 多種蛋白酶抑制劑及磷酸酶抑制劑維持蛋白原有狀態(tài)

普適性強(qiáng) —— 適用于動(dòng)物、植物、真菌及細(xì)菌的細(xì)胞或組織樣品

兼容性強(qiáng) —— 兼容多種實(shí)驗(yàn)室WB，IP及Co-IP等

適用于動(dòng)物、植物、真菌及細(xì)菌的細(xì)胞或組織樣品。提取的蛋白樣品可用于PAGE，Western  Blot，免疫沉淀(Immunoprecipitation, IP)和免疫共沉淀(Co-IP)等實(shí)驗(yàn)。

06 使用方法

06-1 提取細(xì)胞蛋白 a. 貼壁細(xì)胞： 1. 去除培養(yǎng)液后，用1×PBS輕柔漂洗一遍； 2. 按照6孔板每孔加入100-200 μL裂解液的比例加入裂解液，然后用移液槍吹打數(shù)下，使裂解液 和細(xì)胞充分接觸； 規(guī)格 適用于動(dòng)物、植物、真菌及細(xì)菌的細(xì)胞或組織樣品。提取的蛋白樣品可用于PAGE，Western  Blot，免疫沉淀(Immunoprecipitation, IP)和免疫共沉淀(Co-IP)等實(shí)驗(yàn)。3. 冰浴或4℃ 靜置15 min，使細(xì)胞充分裂解。 b. 懸浮細(xì)胞： 1. 低速離心收集細(xì)胞，用1×PBS重懸并清洗一遍； 2. 再次低速離心收集細(xì)胞，去除上清，收集沉淀，通過(guò)渦旋或者手指輕彈管底，分散細(xì)胞； 3. 按100萬(wàn)細(xì)胞加入100-200μL裂解液的比例加入裂解液； 4. 用移液槍吹打數(shù)下使裂解液和細(xì)胞充分接觸，冰浴或4℃靜置15 min，直至無(wú)明顯的細(xì)胞沉淀 5. 若樣品粘稠，可用注射器反復(fù)吹打，降低樣品粘稠度后進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)。 c. 細(xì)菌或酵母： 1. 取1 mL菌液或酵母液低速離心，去除上清，用1×PBS重懸并清洗一遍； 2. 再次離心，去除上清，然后通過(guò)渦旋或者手指輕彈管底，分散底部的細(xì)菌或酵母； 3. 加入100-200 μL裂解液，輕輕渦旋以混勻，冰浴或4℃靜置15 min。 注：細(xì)菌和酵母可以分別使用溶jun酶和破壁酶(Lyticase)消化，再加入裂解液，裂解效果更佳。 d. 收集蛋白樣品： 1. 充分裂解后，10000-14000g離心3-5 min，取上清； 2. 進(jìn)行后續(xù)的PAGE、WB、IP和Co-IP等實(shí)驗(yàn)

06-2 提取組織蛋白 a. 將新鮮組織塊迅速置于預(yù)冷的生理鹽水中，漂洗數(shù)次，洗凈組織血跡，用濾紙吸干組織表面液 體，然后將組織切成細(xì)小的碎片； b.準(zhǔn)備多個(gè)EP管，稱重并做好標(biāo)記，將組織小塊放入EP管中，稱重，按照每20mg組織加入 100-200μL裂解液的比例加入裂解液。如果裂解不到位，可適當(dāng)增加裂解液使用量，如果需要較 高濃度的蛋白樣品，可適當(dāng)減少裂解液使用量； c. 用玻璃勻漿器或組織研磨器冰浴勻漿1-2 min，直至充分裂解； d. 10000-14000g離心3-5 min，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)PAGE、WB、IP和Co-IP等實(shí)驗(yàn)。