Annexin V-APC細(xì)胞凋亡檢測試劑盒
具體成交價以合同協(xié)議為準(zhǔn)
- 公司名稱 上海貝博生物科技有限公司
- 品牌 貝博生物
- 型號
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時間 2024/11/25 20:37:18
- 訪問次數(shù) 205
產(chǎn)品標(biāo)簽
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| 供貨周期 | 一周 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 生物產(chǎn)業(yè) |
|---|
保存溫度
2-8℃避光
Annexin V-APC細(xì)胞凋亡檢測試劑盒注意事項
1.長期不用可以-20℃保存。
2.Annexin V-APC染色液避免反復(fù)凍融。多次凍融會導(dǎo)致失效。
3.Annexin V-APC染色液需要長期保存時可以根據(jù)使用情況進(jìn)行小量分裝后-20℃保存。
4.試劑拆封后請盡快使用完！
2.Annexin V-APC染色液避免反復(fù)凍融。多次凍融會導(dǎo)致失效。
3.Annexin V-APC染色液需要長期保存時可以根據(jù)使用情況進(jìn)行小量分裝后-20℃保存。
4.試劑拆封后請盡快使用完！
有效期
1年
檢測方法
1.流式細(xì)胞儀
2.激光共聚焦
3.熒光顯微鏡
2.激光共聚焦
3.熒光顯微鏡
適用樣本
1.懸浮細(xì)胞
2.貼壁細(xì)胞
2.貼壁細(xì)胞
產(chǎn)品特點
1.方便：可用流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡檢測；
2.快速：1小時內(nèi)即可完成實驗；
3.準(zhǔn)確：能準(zhǔn)確區(qū)分活細(xì)胞、凋亡細(xì)胞和壞死細(xì)胞，并計數(shù)各群細(xì)胞的比例。
2.快速：1小時內(nèi)即可完成實驗；
3.準(zhǔn)確：能準(zhǔn)確區(qū)分活細(xì)胞、凋亡細(xì)胞和壞死細(xì)胞，并計數(shù)各群細(xì)胞的比例。
產(chǎn)品應(yīng)用
1.流式細(xì)胞儀
2.激光共聚焦
3.熒光顯微鏡
2.激光共聚焦
3.熒光顯微鏡
儀器準(zhǔn)備
1.流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡或激光共聚焦
2.離心機
3.移液器
4.冰箱
5.冰盒
2.離心機
3.移液器
4.冰箱
5.冰盒
試劑準(zhǔn)備
1.PBS 緩沖液（pH7.4，實驗室常用的10mM磷酸緩沖鹽溶液（1X））
2.或者HBSS（Hank's Balanced Salt Solution）
2.或者HBSS（Hank's Balanced Salt Solution）
耗材準(zhǔn)備
1.離心管
2.吸頭
3.一次性手套
4.鋁箔
2.吸頭
3.一次性手套
4.鋁箔
Annexin V-APC細(xì)胞凋亡檢測試劑盒使用注意事項
1.螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體收集至管底，避免開蓋時液體損失導(dǎo)致試劑量不夠用。
2.細(xì)胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細(xì)胞。離心力在不損失細(xì)胞的前提下盡可能小，重懸細(xì)胞是動作要輕柔，避免多次反復(fù)的激烈吹打。不用渦旋振蕩器。
3.Annexin V-FITC（等）和Propidium iodide（等）是光敏物質(zhì)，在操作時請注意避光，盡量減少它們暴露在光下的時間。有必要時可以使用帶蓋子的冰盒或鋁箔紙避光。標(biāo)記后將細(xì)胞保持在避光環(huán)境中。移液過程中短暫暴露在光線下（<30秒）是可以接受的。
4.由于細(xì)胞凋亡是一個快速和動態(tài)的過程，因此在染色后立即進(jìn)行分析。
2.細(xì)胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細(xì)胞。離心力在不損失細(xì)胞的前提下盡可能小，重懸細(xì)胞是動作要輕柔，避免多次反復(fù)的激烈吹打。不用渦旋振蕩器。
3.Annexin V-FITC（等）和Propidium iodide（等）是光敏物質(zhì)，在操作時請注意避光，盡量減少它們暴露在光下的時間。有必要時可以使用帶蓋子的冰盒或鋁箔紙避光。標(biāo)記后將細(xì)胞保持在避光環(huán)境中。移液過程中短暫暴露在光線下（<30秒）是可以接受的。
4.由于細(xì)胞凋亡是一個快速和動態(tài)的過程，因此在染色后立即進(jìn)行分析。
5.使用Annexin V-FITC（等） 試劑盒檢測凋亡需要針對活細(xì)胞。不要固定細(xì)胞，固定操作會對結(jié)果產(chǎn)生干擾。
使用方法
樣品染色：
1. 離心收集懸浮細(xì)胞。離心機300×g -500×g力，2-8°C，離心時間5分鐘，棄培養(yǎng)基。
2. 用冷PBS洗滌細(xì)胞兩次。（300×g -400×g，2-8°C，離心時間5分鐘收集細(xì)胞）。
3. 用100 μl 1X Annexin V結(jié)合液懸浮細(xì)胞，濃度大約為1-5 X 106 cells/ml。
4. 在細(xì)胞懸浮液中加入5 μl Annexin V-APC染色液，輕輕混勻后于2-8°C避光條件下孵育5-15分鐘。
5. 加入PI（或7-AAD）染色液后輕輕混勻于2-8°C避光條件下孵育1-3分鐘。（此步驟選做，根據(jù)實驗需要也可以只做APC單染）。
6. 加入400 μl PBS或1X Annexin V結(jié)合液，輕輕混勻。
7. 立即用流式細(xì)胞儀檢測。
流式細(xì)胞儀分析：
經(jīng)處理過的細(xì)胞此時可以在流式細(xì)胞儀上分析。
按照常規(guī)的流式凋亡檢測的操作即可。
Annexin V-APC的熒光激發(fā)波長652 m，發(fā)射波長670 m；PI熒光激發(fā)波長535 m，發(fā)射波長在620 m。
上機檢測前，須用待測細(xì)胞制備質(zhì)控樣本來設(shè)定流式細(xì)胞儀的熒光補償和設(shè)置十字門的范圍：
（I） 未轉(zhuǎn)染GFP等標(biāo)記的細(xì)胞
① 空白管：陰性對照組細(xì)胞，沒有染色的細(xì)胞。不加Annexin V/APC，PI。用于調(diào)節(jié)電壓。
② 單染管：有明顯凋亡的細(xì)胞，只加Annexin V/APC染色。用于調(diào)節(jié)補償。
③ 單染管：有明顯凋亡的細(xì)胞，只加PI染色。用于調(diào)節(jié)補償
④ 檢測管：待測的處理細(xì)胞，加Annexin V/APC，PI。用空白管和單陽管調(diào)節(jié)好電壓補償后，獲得所需要的流式數(shù)據(jù)。
（II） 轉(zhuǎn)染GFP細(xì)胞
① 未轉(zhuǎn)染空白管：未轉(zhuǎn)染細(xì)胞，陰性對照組細(xì)胞，沒有染色的細(xì)胞。不加Annexin V/APC，PI。用于調(diào)節(jié)電壓。
② 轉(zhuǎn)染GFP空白管：轉(zhuǎn)染GFP的對照組細(xì)胞，沒有染色的細(xì)胞。不加Annexin V/APC，PI。用于調(diào)補償
③ 未轉(zhuǎn)染單染管：未轉(zhuǎn)染且有明顯凋亡的細(xì)胞，只加Annexin V/APC染色。用于調(diào)節(jié)補償。
④ 未轉(zhuǎn)染單染管：未轉(zhuǎn)染且有明顯凋亡的細(xì)胞，只加PI染色。用于調(diào)節(jié)補償
⑤ 檢測管：待測的處理細(xì)胞，加Annexin V/APC，PI。用空白管和單陽管調(diào)節(jié)好電壓補償后，獲得所需要的流式數(shù)據(jù)。
1. 離心收集懸浮細(xì)胞。離心機300×g -500×g力，2-8°C，離心時間5分鐘，棄培養(yǎng)基。
2. 用冷PBS洗滌細(xì)胞兩次。（300×g -400×g，2-8°C，離心時間5分鐘收集細(xì)胞）。
3. 用100 μl 1X Annexin V結(jié)合液懸浮細(xì)胞，濃度大約為1-5 X 106 cells/ml。
4. 在細(xì)胞懸浮液中加入5 μl Annexin V-APC染色液，輕輕混勻后于2-8°C避光條件下孵育5-15分鐘。
5. 加入PI（或7-AAD）染色液后輕輕混勻于2-8°C避光條件下孵育1-3分鐘。（此步驟選做，根據(jù)實驗需要也可以只做APC單染）。
6. 加入400 μl PBS或1X Annexin V結(jié)合液，輕輕混勻。
7. 立即用流式細(xì)胞儀檢測。
流式細(xì)胞儀分析：
經(jīng)處理過的細(xì)胞此時可以在流式細(xì)胞儀上分析。
按照常規(guī)的流式凋亡檢測的操作即可。
Annexin V-APC的熒光激發(fā)波長652 m，發(fā)射波長670 m；PI熒光激發(fā)波長535 m，發(fā)射波長在620 m。
上機檢測前，須用待測細(xì)胞制備質(zhì)控樣本來設(shè)定流式細(xì)胞儀的熒光補償和設(shè)置十字門的范圍：
（I） 未轉(zhuǎn)染GFP等標(biāo)記的細(xì)胞
① 空白管：陰性對照組細(xì)胞，沒有染色的細(xì)胞。不加Annexin V/APC，PI。用于調(diào)節(jié)電壓。
② 單染管：有明顯凋亡的細(xì)胞，只加Annexin V/APC染色。用于調(diào)節(jié)補償。
③ 單染管：有明顯凋亡的細(xì)胞，只加PI染色。用于調(diào)節(jié)補償
④ 檢測管：待測的處理細(xì)胞，加Annexin V/APC，PI。用空白管和單陽管調(diào)節(jié)好電壓補償后，獲得所需要的流式數(shù)據(jù)。
（II） 轉(zhuǎn)染GFP細(xì)胞
① 未轉(zhuǎn)染空白管：未轉(zhuǎn)染細(xì)胞，陰性對照組細(xì)胞，沒有染色的細(xì)胞。不加Annexin V/APC，PI。用于調(diào)節(jié)電壓。
② 轉(zhuǎn)染GFP空白管：轉(zhuǎn)染GFP的對照組細(xì)胞，沒有染色的細(xì)胞。不加Annexin V/APC，PI。用于調(diào)補償
③ 未轉(zhuǎn)染單染管：未轉(zhuǎn)染且有明顯凋亡的細(xì)胞，只加Annexin V/APC染色。用于調(diào)節(jié)補償。
④ 未轉(zhuǎn)染單染管：未轉(zhuǎn)染且有明顯凋亡的細(xì)胞，只加PI染色。用于調(diào)節(jié)補償
⑤ 檢測管：待測的處理細(xì)胞，加Annexin V/APC，PI。用空白管和單陽管調(diào)節(jié)好電壓補償后，獲得所需要的流式數(shù)據(jù)。
常見問題分析
實驗過程中Annexin V染不上色或陽性率偏低。可能的原因如下：
1. 用于檢測的流式細(xì)胞儀/顯微鏡設(shè)置不當(dāng)。調(diào)整使用正確的儀器設(shè)置。
2. 確定實驗中的誘導(dǎo)劑是否能產(chǎn)生凋亡。可通過設(shè)定確切凋亡誘導(dǎo)效果的陽性藥物對照來排除這一情況。
3. 細(xì)胞未啟動凋亡。重新確定誘導(dǎo)后凋亡啟動的時間點（時程實驗）。
4. 細(xì)胞數(shù)量偏少。增加細(xì)胞數(shù)量。
5. 貼壁細(xì)胞消化不當(dāng)。Annexin V 跟PS 的結(jié)合需要Ca2+離子，結(jié)合液中含有Ca2+，EDTA 的消化會影響染色，建議使用無EDTA 的，或者消化后用PBS洗滌干凈。
實驗過程中陽性率偏高。可能的原因如下：
1. 用于檢測的流式細(xì)胞儀/顯微鏡設(shè)置不當(dāng)。調(diào)整使用正確的儀器設(shè)置。
2. 細(xì)胞本身活力太差。實驗中發(fā)現(xiàn)未經(jīng)誘導(dǎo)凋亡的對照細(xì)胞經(jīng)染色后AnnexinV+/PI+雙陽性的細(xì)胞比例過高，造成這種結(jié)果的原因可能是細(xì)胞本身活力太差。建議用臺盼藍(lán)染色計算細(xì)胞的活力，臺盼藍(lán)拒染的細(xì)胞應(yīng)大于95%。若活力偏低低，建議重新復(fù)蘇細(xì)胞，通常剛復(fù)蘇的細(xì)胞至少要傳代3 次以后才能進(jìn)行實驗。
1. 用于檢測的流式細(xì)胞儀/顯微鏡設(shè)置不當(dāng)。調(diào)整使用正確的儀器設(shè)置。
2. 確定實驗中的誘導(dǎo)劑是否能產(chǎn)生凋亡。可通過設(shè)定確切凋亡誘導(dǎo)效果的陽性藥物對照來排除這一情況。
3. 細(xì)胞未啟動凋亡。重新確定誘導(dǎo)后凋亡啟動的時間點（時程實驗）。
4. 細(xì)胞數(shù)量偏少。增加細(xì)胞數(shù)量。
5. 貼壁細(xì)胞消化不當(dāng)。Annexin V 跟PS 的結(jié)合需要Ca2+離子，結(jié)合液中含有Ca2+，EDTA 的消化會影響染色，建議使用無EDTA 的，或者消化后用PBS洗滌干凈。
實驗過程中陽性率偏高。可能的原因如下：
1. 用于檢測的流式細(xì)胞儀/顯微鏡設(shè)置不當(dāng)。調(diào)整使用正確的儀器設(shè)置。
2. 細(xì)胞本身活力太差。實驗中發(fā)現(xiàn)未經(jīng)誘導(dǎo)凋亡的對照細(xì)胞經(jīng)染色后AnnexinV+/PI+雙陽性的細(xì)胞比例過高，造成這種結(jié)果的原因可能是細(xì)胞本身活力太差。建議用臺盼藍(lán)染色計算細(xì)胞的活力，臺盼藍(lán)拒染的細(xì)胞應(yīng)大于95%。若活力偏低低，建議重新復(fù)蘇細(xì)胞，通常剛復(fù)蘇的細(xì)胞至少要傳代3 次以后才能進(jìn)行實驗。
參考文獻(xiàn)
1.Hongjuan Li, et al.
Nucleus-targeted nano delivery system eradicates cancer stem cells by combined thermotherapy and hypoxia-activated chemotherapy
Biomaterials 2019 （IF=10.317）
2.Wei Bing, et al.
Programmed Bacteria Death Induced by Carbon Dots with Different Surface Charge
Small 2016 （IF=11.459）
3.Linchong Sun, et al.
cMyc-mediated activation of serine biosynthesis pathway is critical for cancer progression under nutrient deprivation conditions
Advanced Functional Materials 2015 （IF=16.836）
5.Wenqiao Zang, et al.
miR-663 attenuates tumor growth and invasiveness by targeting eEF1A2 in pancreatic cancer
Molecular Cancer 2015 （IF=15.302）
Nucleus-targeted nano delivery system eradicates cancer stem cells by combined thermotherapy and hypoxia-activated chemotherapy
Biomaterials 2019 （IF=10.317）
2.Wei Bing, et al.
Programmed Bacteria Death Induced by Carbon Dots with Different Surface Charge
Small 2016 （IF=11.459）
3.Linchong Sun, et al.
cMyc-mediated activation of serine biosynthesis pathway is critical for cancer progression under nutrient deprivation conditions
Cell Research 2015 （IF=20.507）
4.Kerong Deng, et al.
Advanced Functional Materials 2015 （IF=16.836）
5.Wenqiao Zang, et al.
miR-663 attenuates tumor growth and invasiveness by targeting eEF1A2 in pancreatic cancer
Molecular Cancer 2015 （IF=15.302）
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