裸鼠肝原位瘤藥效評估

先用組織學(xué)完整的新鮮人肝癌組織接種于裸鼠皮下，形成皮下移植瘤，然后用此移植瘤組織再接種于裸鼠肝內(nèi)，建立肝原位移植瘤模型（間接肝原位移植瘤模型），并將其與直接肝原位移植瘤模型、皮下移植瘤模型和腹腔內(nèi)移植瘤模型作比較。

一、間接肝原位移植瘤模型的制備　

1. 用新鮮的肝癌外科手shu切除標(biāo)本（來自長海醫(yī)院，患者為1名47歲男性，病理診斷：肝左葉肝細(xì)胞癌，粗梁型，Ⅱ 級），在Hanks液中，去除壞死組織和非癌組織后切成1～2 mm3小塊。

2. 取2塊瘤組織，在離體40 min內(nèi)用粗針頭植入裸鼠腰背部皮下，待皮下移植瘤長到直徑約1 cm時切取腫瘤，在Hanks 液中，去除壞死組織后切成1～2 mm3小塊，裸鼠用戊巴bi妥鈉腹腔麻醉后，行左上腹橫切口，暴露肝臟。

3. 取上述2塊瘤組織，在離體40 min內(nèi)用粗針頭植入裸鼠肝右葉深部實質(zhì)內(nèi)，全層關(guān)腹。

二、直接肝原位移植瘤模型的制備　

1. 同一例新鮮肝癌手術(shù)切除標(biāo)本，處理方法同皮下移植，裸鼠處理同間接肝原位移植，取2塊瘤組織，在離體40 min內(nèi) 用粗針頭直接植入裸鼠肝右葉深部實質(zhì)內(nèi)。

2. 皮下移植瘤模型和腹腔內(nèi)移植瘤模型的制備。

三、病理檢查和相關(guān)指標(biāo)檢測

1. 解剖和組織學(xué)檢查

（1）所有裸鼠接種后，分組分籠飼養(yǎng)，自由進食，每天觀察1～2次。

（2）當(dāng)裸鼠處于全身衰竭狀態(tài)時處死并作大體解剖，對接種瘤和轉(zhuǎn)移瘤分別進行觀察、測量，記錄腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移情況，重要器官（主要為肝和肺）經(jīng)10%中性甲醛固定后，常規(guī)石蠟制片，光學(xué)顯微鏡檢查。

2. 周圍血甲胎蛋白(AFP)檢測

處死前，均采用摘眼球采血的方法獲得血液，用生化法檢測AFP的分泌量。

3. 瘤細(xì)胞DNA含量分析

留取部分移植瘤標(biāo)本采用流式細(xì)胞術(shù)進行DNA含量分析。

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