BspQI 限制性內(nèi)切酶

產(chǎn)品貨號(hào)：F3503S

儲(chǔ)存條件：-20℃

同裂酶：SapI, LguI, PciSI；（注： 同裂酶對(duì)于不同的甲基化修飾可能具有不同敏感性。）

產(chǎn)品組成

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

BspQI 屬于 Type IIS 型限制酶，識(shí)別非回文序列，并在識(shí)別序列之外進(jìn)行切割，常用于 Golden Gate 組裝。經(jīng)過(guò)優(yōu)化的反應(yīng) Buffer

使 BspQI 最大限度發(fā)揮功能，同時(shí)反應(yīng)緩沖液包含重組白蛋白，其可增強(qiáng)多種酶的穩(wěn)定性。

建議反應(yīng)條件

1× HN 緩沖液；50℃溫育；參照“DNA 酶切流程”配制反應(yīng)體系。

失活條件

80℃溫育 20 min。

活性定義

1 活性單位 (U) 是指在 50 μl 反應(yīng)體系中，50℃ 1 h 內(nèi)wanquan酶切1 µg λDNA 所需的酶量

質(zhì)量控制

超長(zhǎng)時(shí)間溫育檢測(cè)

最適反應(yīng)溫度下，將 10 U BspQI 與 1 μg λDNA 共同溫育 3 h，未檢測(cè)到其他核酸酶污染或星號(hào)活性引起的底物非特異性降解，延時(shí)

酶切可能出現(xiàn)星號(hào)活性。

酶切-連接-再酶切檢測(cè)

最適反應(yīng)溫度下，使用 10 U BspQI 消化底物，回收酶切產(chǎn)物。在 22℃下使用適量 T4 DNA Ligase (Fast) 可以將酶切產(chǎn)物重新連接。

將連接產(chǎn)物再次回收后，使用相同的內(nèi)切酶可以重新切開連接產(chǎn)物。

DNase 殘留檢測(cè)

將 10 U BspQI 與雙鏈 DNA 底物在 37℃溫育 16 h，通過(guò) DNA 電泳檢測(cè)雙鏈 DNA 底物無(wú)變化。

使用方法

1.DNA 快速酶切流程

（1）在冰上按如下建議的加樣順序配制反應(yīng)體系：

a. DNA 底物中應(yīng)不含ben fen、氯仿、乙醇、EDTA、洗滌劑或高濃度鹽，否則將會(huì)影響 BspQI 酶活性；

（2）輕柔吸打或輕彈管壁以混勻（切勿渦旋），然后瞬時(shí)離心以收集掛壁液滴；

（3）50℃溫育 50min-1h；

（4）80℃溫育 20min 即可使酶失活，或者通過(guò)吸附柱或benfen / 氯仿純化終止反應(yīng)。

2.注意事項(xiàng)

① 反應(yīng)體系中加入的酶體積不應(yīng)超過(guò)總體積的 10%，避免酶中過(guò)多的甘油引起星號(hào)活性；

② 限制性內(nèi)切酶存儲(chǔ)緩沖液中的添加劑 ( 例如甘油、鹽 ) 與底物溶液中的污染物 ( 例如鹽、EDTA 或乙醇等 ) 相同，反應(yīng)體積越小，酶切反應(yīng)抑制效應(yīng)越強(qiáng)。

不同 DNA 中的酶切位點(diǎn)數(shù)量

甲基化修飾影響