產品信息

其他自備材料和試劑

MG&ABW基質膠

上皮類器官基礎培養基  

類器官消化液  

潤洗液

類器官冷凍保存培養基(無血清)  

DPBS (1X)，液體，不含鈣和鎂

小鼠結腸類器官complete medium培養基的制備

使用無菌操作技術配制小鼠結腸類器官的擴增或分化培養基。以配制 10 mL 為例配置小鼠結腸類器官擴增或分化培養基，

如所需量不同，可相應調整用量。

1. 冰上解凍 Mouse Colonic Organoid Supplement B (50x)，Mouse Colonic Organoid Supplement C (250x)和 Mouse

Colonic Organoid Supplement D (250x)。

2. 注意：各 Supplement 添加物解凍后，建議分別分裝后保存取用，避免反復凍融。

3. 小鼠結腸類器官的擴增培養基：將 200 uL Mouse Colonic Organoid Supplement B (50x)，40 μL Mouse Colonic

Organoid Supplement C (250x) 和 40 μL Mouse Colonic Organoid Supplement D (250x) 加 至 9.72 mL Mouse

Colonic Organoid Basal Medium 中，充分混合，配制成 10 mL 小鼠結腸類器官擴增培養基。

4. 小鼠結腸類器官的分化培養基：將 200 μL Mouse Colonic Organoid Supplement B (50x)，40 μL Mouse Colonic

Organoid Supplement C (250x) 加至 9.76 mL Mouse Colonic Organoid Basal Medium 中，充分混合，配制成 10 mL

小鼠結腸類器官分化培養基。

5. 注意：配制后的小鼠結腸類器官擴增或分化培養基可在 2 - 8°C 儲存 10 天。此外，Mouse Colonic Organoid

Supplement B(50x)內含有細菌及真菌抗生素(50x)。

8. 將接種完成后的培養板至于 37℃二氧化碳恒溫培養箱中，孵育 15 min 左右待基質膠凝固后取出。

9. 配制小鼠結腸類器官擴增培養基。

10. 待基質膠凝固后，沿孔壁加入提前預熱的小鼠結腸類器官擴增培養基，24 孔板每孔 500 μL。

11. 將 24 孔板置于 37℃二氧化碳培養箱中培養，待新長出的類器官直徑超過 100 μm 后可進行分化實驗。

12. 分化前需要吸去 24 孔板培養孔中的小鼠結腸類器官擴增培養基，并加入 500 μL 提前配制的分化培養基，分化

通常需要 4 d 以上時間，分化期間每隔 2 d 更換一次分化培養基，分化完成后可進行后續實驗。