大鼠皮層神經元細胞 百歐博偉生物 原代細胞

大鼠皮層神經元細胞 百歐博偉生物 原代細胞

一、基本信息

平臺編號：bio-73730

產品規格：5×10^5cells/T25細胞培養瓶

產品名稱：大鼠皮層神經元細胞

組織來源：腦組織

注意事項：僅用于科學研究或者工業應用等非醫療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用

二、細胞簡介

大鼠皮層神經元細胞分離自腦皮層組織；皮層神經元細胞是構成中樞神經系統結構和功能的基本單位。神經元是具有長突觸（軸突）的細胞，它由細胞體和細胞突起構成。在長的軸突上套有一層鞘，組成神經纖維，它的末端的細小分支叫做神經末梢。細胞體位于腦、脊髓和神經節中，細胞突起可延伸至全身各器官和組織中。細胞體是細胞含核的部分，其形狀大小有很大差別，直徑約4-120微米。核大而圓，位于細胞，染色質少，核仁明顯。細胞質內有斑塊狀的核外染色質，還有許多神經元纖維。細胞突起是由細胞體延伸出來的細長部分，又可分為樹突和軸突。每個神經元可以有一或多個樹突，可以接受刺激并將興奮傳入細胞體。每個神經元只有一個軸突，可以把興奮從胞體傳送到另一個神經元或其他組織，如肌肉或腺體。皮質神經元是大腦皮質的主要組成細胞之一，是大腦進行功能活動調節的基本單位，參與動物多種中樞神經系統疾病的病理過程。通過形態學觀察顯示神經元從貼壁、伸出突起開始；突起逐漸增多，而后突起進一步增多并逐漸成網，同時細胞胞體增大，周邊光暈明顯。10-12d細胞豐滿，隨后神經元開始裂解，突起逐漸減少，細胞已退化變性，輪廓模糊，光暈消失，細胞變形。 本公司生產的大鼠皮層神經元細胞采用消化法結合神經元專用培養基培養、化學試劑抑制法篩選制備而來，細胞總量約為5×10^5cells/瓶；細胞經MAP-2免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

三、培養基信息

Neurobasal-A、B-27 Supplement、Penicillin、Streptomycin等。我們推薦使用大鼠皮層神經元細胞專用培養基（產品貨號：CM-R105）作為體外培養大鼠皮層神經元細胞的培養基。

四、液體配制

硼酸硼砂緩沖液：0.05M四硼化鈉45ml，0.2M硼酸55ml，pH8.4；

－EDTA消化液：－0.125g；EDTA－0.2g；D-Hanks平衡鹽液定容至100ml

所用的培養板、培養瓶或玻片預先經100μg/L多聚賴氨酸硼酸鹽緩沖液于37℃包被4h，三蒸水洗三遍晾干備用。

五、操作步驟如下

1、孕16d SD大鼠經麻醉后，碘酒、75％乙醇消毒腹部皮膚，依次剪開皮膚、肌肉、皮下筋膜，無菌操作下取出胚胎放入預冷的D-Hanks平衡鹽液中。

2、在解剖顯微鏡下分離并取出胚胎大腦皮層，除去腦膜，剪碎組織成約1mm3大小，加入-EDTA消化液并放入37℃孵箱內消化20min，中間搖晃一次。

3、隨后用滴管吸出組織轉移到裝有預冷的培養液（DMEM＋10％FBS）的離心管內終止消化液作用5min。

4、用滴管吸出組織轉移到裝有預冷的DMEM＋10％FBS的離心管內，用火焰拋光的巴斯德滴管吹打數次，靜置后取上清吸到另一支離心管內。重復上述步驟2～3次。

5、將所收集的上清經200目篩網過濾。

6、過濾后的細胞懸液于800r/min離心5min，棄上清，管內加入新鮮培養液（DMEM＋20％FBS）并吹打成單細胞懸液。

7、細胞計數，調整細胞密度按1.5×105/cm2種入6孔板內，放入CO2孵箱中培養。培養48h后換液并加入Ara-C使其終濃度為1×10-5mM/L。Ara-C作用24h后全量換液。以后每隔3天半量換液一次。

六、注意以下幾點

1、上面的步驟是傳統方法。有許多地方可以進行改動：如消化時可以直接用0.125－0.25的消化15－20min左右，也可用DNA酶進行消化，有人還直接進行吹打，都可行。

2、上面雖然時大鼠皮層神經元，但是同樣適用于小鼠，但是應該選擇 孕13d 左右的小鼠。

3、神經元是一種比較難培養的細胞，因此在接種時細胞的密度一定要夠！

4、在玻片上培養神經元時，一定要注意玻片的來源和處理方法，這個非常重要，對神經細胞的影響是很大的。如果您現在在玻片上培養的神經元生長情況還不錯的話，那么您在以后的培養中還是用同一來源（廠家）的玻片。

5、如果有B27和neurobasal培養基，那么就方便了（不用加AraC）--

（1）把細胞懸液用（DMEM＋20％FBS）懸浮，種到培養皿上6－12h后，全量換成2％B27的neurobasal培養基，繼續培養，3d半量換液。

（2）把細胞懸液用直接用2％B27的neurobasal培養基懸浮接種。

（3）可以用新生1d內的胎鼠皮層直接培養。

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