原位雜交實驗步驟

原位雜交第一天進行重新水化和固定、預雜交、雜交。

原位雜交第二天進行1將探針回收，放千-20C保存(通常探針可重復使用十次左右)2加入50%甲酰胺/2XSSCT溶液1號

升，60℃，放置30分鐘，重復一次。3置換2XSSCT1ml，60℃，放置15分鐘。4置換0.2XSSCT1ml，60℃，放置30分鐘

重復一次。5用MABT洗兩次，每次五分鐘，放在搖床輕輕搖動。6室溫下加1ml1:2:7溶液，時間為一小時。 7 按1:

3000的比例在1∶2:7溶液中加入酶連地高XIN抗體，4C 冰箱過夜。

原位雜交第三天進行1)用1ml含10%熱滅活血清的MABT溶液置換抗體溶液，放置搖床上25分鐘，然后用1mIMABT置換

25分鐘，再用1mIMABT溶液置換，一小時以上，最后用1mlMABT溶液置換，25分鐘。2)用1ml 1mM**米唑的Stainino

buffer洗一次，每次放置五分鐘。3)將胚胎轉入十六孔板中，吸去staining buffer.加上300ulBM Purple AP Substrate(底

物，用之前加5mM左旋米唑),十六孔板外面包上錫箔紙以避光,避免搖動,室溫下顯色。4)每隔一小時觀察胚胎是否開

始顯色5)將顯色的胚胎中的底物吸出，用PBST洗兩三次后加上4%多聚.甲醛固定，拍照。6)4C冰箱保存。

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