支原體肉湯培養基的實驗方法與操作步驟！

支原體肉湯培養基的實驗方法與操作步驟！

一、基本信息

平臺編號：bio-55787

規格：250g

英文名稱：Mycoplasma Broth Medium

名稱：支原體肉湯培養基

用途：用于培養支原體的基礎培養基

注意事項：僅用于科學研究或者工業應用等非醫療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用

二、成分（g/L）

豬胃消化物 10.0

牛肉浸粉 5.0

酵母浸粉 5.0

氯化鈉 2.5

葡萄糖 5.0

酚紅 0.02

pH值7.6±0.2 25℃

三、用法

稱取本品 27.52g,加熱溶解于 800ml  蒸餾水中,121℃高壓滅菌 15 分鐘,冷至室溫,無菌操作加入 滅活小牛血清或馬血清 200ml 和 80 萬單位,混勻,分裝無菌試管,備用。

四、操作步驟

1、準確稱量試劑：根據不同的菌類和用途，選擇適宜的培養基，培養基所需試劑必須純凈。

2、校正pH值：將稱量好的培養基各種成分放入容器內，標記劃線，加熱溶解，補充水分，測定酸堿度，常用pH6.8～8.0的精密試紙或酸度計測定。用1N NaOH和1N HCl調節pH值到適宜范圍內。

3、過濾：將玻璃漏斗置鐵架上，再用紗布夾棉花或用濾紙放在漏斗中，將上述培養基倒入其中過濾至透明。

4、分裝：將過濾后的培養基分裝于中試管或三角瓶內（試管內每支裝5mL；三角瓶中裝100～150ml），塞好棉塞用牛皮紙包扎好，準備滅菌。

5、滅菌：培養基的滅菌，常用高壓蒸汽滅菌法。一般微生物的營養細胞在水中煮沸后即被殺死，但細菌的芽胞有較強的抗熱性，須經高壓蒸汽滅菌才能達到滅菌的目的。根據蒸汽溫度隨壓力升高而上升的原理，即壓力越大，蒸汽溫度就越高。因此，在同一溫度條件下，采用高壓蒸汽滅菌比干熱滅菌法效果要好。而且在濕熱情況下，菌體吸收水分后，其蛋白質易于凝固變性，因為蒸汽的穿透力強，殺菌效果好。

五、實驗方法

1、產品名稱培養基陽性組：取稀釋后的各試驗菌懸液1ml分別加于預先制備的試管培養基中，每種細菌接種兩支試管。同時分別取1ml菌懸液加于無菌空平皿中，用于計數，每種細菌做兩個平板。

2、培養基陰性組：即空白對照，即不添加菌液。

3、接種量計數：步驟1中的平皿中，細菌傾注胰酪大豆胨瓊脂培養基，霉菌和白色念珠菌傾注沙氏葡萄糖瓊脂培養基。同時每種培養基做1個空白。

4、培養條件：

無菌檢查：20～25℃培養14天或直至出現渾濁（不超過14天）

MPN計數：30～35℃培養箱中培養3天

控制菌檢查：30～35℃培養箱中培養18～24小時

傾注計數用的的胰酪大豆胨瓊脂培養基平板置30～35℃培養箱中培養3天

傾注計數用的沙氏葡萄糖瓊脂培養基平板置20～25℃培養箱中培養3～5天

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