Annexin V-FITC / PI雙染凋亡檢測試劑盒

Annexin V-FITC / PI雙染凋亡檢測試劑盒

檢測原理

實驗操作指南步驟 

一步法

1．細胞按照實驗方案進行凋亡誘導，300 g 離心 5 min，棄上清，收集細胞，PBS 洗滌一次，輕輕重懸細胞并計數。注：本品僅在懸浮培養的細胞中驗證，良好的細胞狀態是實驗的關鍵。貼壁生長的細胞用于凋亡檢測時，可能會因為胰酶消化、吹打等處理導致細胞的壞死或凋亡，對實驗結果可能存在不可控的影響，請謹慎處理。

 2．取 1~5 × 105重懸的細胞，300 g 離心 5 min，棄上清。用 PBS 洗滌細胞一次，離心后棄上清，加入 500 μL 稀釋的 1 × Annexin V Binding Buffer 工作液重懸細胞。 

3．細胞懸液中加入 5 μL 的 Annexin V-FITC 和 5 μL 的 PI 染色液。 

4．輕柔渦旋混勻后，室溫避光孵育 15~20 min。

5．反應完成后立即上機檢測。如不能及時檢測，請于冰上避光靜置并于 1 小時內完成檢測。注：a)流式細胞儀檢測請取陰性樣本（如未經藥物處理的活細胞）進行 Annexin V-FITC 和 PI 雙染，作為陰性對照；另取陽性樣本（如毒性藥物處理的細胞）分別進行 Annexin V-FITC 和 PI 單染，作為調節熒光補償的單陽對照。b)流式細胞儀檢測時 Annexin V-FITC 可用 FITC 通道，PI 優先選擇 PerCP/Cy5.5 通道，其次是 ECD 通道。

兩步法 

1．細胞按照實驗方案進行凋亡誘導，300 g 離心 5 min，棄上清，收集細胞，PBS 洗滌一次，輕輕重懸細胞并計數。注：本品僅在懸浮培養的細胞中驗證，良好的細胞狀態是實驗的關鍵。貼壁生長的細胞用于凋亡檢測時，可能會因為胰酶消化、吹打等處理導致細胞的壞死或凋亡，對實驗結果可能存在不可控的影響，請謹慎處理。 

2．取 1~5 × 105重懸的細胞，300 g 離心 5 min，棄上清。用 PBS 洗滌細胞一次，離心后棄上清，加入 100 μL 稀釋的 1 × Annexin V Binding Buffer 工作液重懸細胞。 

3．細胞懸液中加入 2.5 μL 的 Annexin V-FITC 和 2.5 μL 的 PI 染色液。（由于兩步法分辨率更高，染色液用量減半依然可得到媲美一步法的效果；用戶亦可根據自己的模型進行滴定后加入適量的染色液，用更少的量獲得高質量的結果。）4．輕柔渦旋混勻后，室溫避光孵育 15~20 min。 

5．加入 400 μL 稀釋的 1 × Annexin V Binding Buffer，混勻樣本。

 6．立即上機檢測。如不能及時檢測，請于冰上避光靜置并于 1 小時內完成檢測。注：a)流式細胞儀檢測請取陰性樣本（如未經藥物處理的活細胞）進行 Annexin V-FITC 和 PI 雙染，作為陰性對照；另取陽性樣本（如毒性藥物處理的細胞）分別進行 FITC 和 PI 單染，作為調節熒光補償的單陽對照。b)流式細胞儀檢測時 Annexin V-FITC 可用 FITC 通道，PI 優先選擇 PerCP/Cy5.5 通道，其次是 ECD 通道。