極威生物HPLC技術平臺項目2022介紹

高效液相色譜（High-performance liquid chromatography, HPLC） 是一種色譜分析技術，依賴于泵加壓后色譜柱中填充物對于樣品中各組分吸附力的不同，從而實現各組分快速的分離。

色譜法的分離原理是：溶于流動相中的各組分經過固定相時，由于與固定相（stationary phase）發生作用（吸附、分配、離子吸引、排阻、親和）的大小、強弱不同，在固定相中滯留時間不同，從而先后從固定相中流出。又稱為色層法、層析法。

液相色譜法開始階段是用大直徑的玻璃管柱在室溫和常壓下用液位差輸送流動相，稱為經典液相色譜法，此方法柱效低、時間長（常有幾個小時）。高效液相色譜法（High performance Liquid Chromatography，HPLC）是在經典液相色譜法的基礎上，于60年代后期引入了氣相色譜理論而迅速發展起來的。

它與經典液相色譜法的區別是填料顆粒小而均勻，小顆粒具有高柱效，但會引起高阻力，需用高壓輸送流動相，故又稱高壓液相色譜法（High Pressure Liquid Chromatography，HPLC）。又因分析速度快而稱為高速液相色譜法（High Speed Liquid Chromatography，HSLP）。也稱現代液相色譜。

HPLC可以實現絕大部分物質的分離鑒定。液相色譜的誕生，源于氣相色譜對于高沸點有機物分析，如蛋白質、核酸等不易氣化的大分子物質的局限性。自1980年代，隨著適用于分離蛋白質和其它生物大分子的色譜柱進入市場以來，HPLC開拓了它在生物化學的應用領域。HPLC是目前應用*的分析技術，質譜作為分離技術與HPLC競爭的同時又可以在多方面互補使用，如LC-MS。極威技術平臺使用高效液相色譜的方法，可實現對樣品進行鑒定，可高效、精準的進行定量分析。

HPLC分離原理：固定相是固體吸附劑，吸附劑是多孔性微粒物質，表面有吸附中心。樣品組分與流動相競爭吸附中心。各組分的吸附能力不同，使組分在固定相中產生保留時間不同，從而實現分離。

極威生物HPLC技術平臺項目2022介紹

(1)紫外可見分光技術器(UVD)。

(2)雙光路雙流路紫外/熒光技術器(UV/FLD-1)。
(3)蒸發光散射技術器(ELSD)。
(4)液相色譜-液相色譜聯用(HPLC-HPLC)。

高效液相色譜法的特點和優點

HPLC有以下特點：

高壓——壓力可達150～300Kg/cm 2。色譜柱每米降壓為75Kg/cm 2以上。

高速——流速為0.1～10.0 ml/min。

高效——可達5000塔板每米。在一根柱中同時分離成份可達100種。

高靈敏度——紫外技術器靈敏度可達0.01ng。同時消耗樣品少。

HPLC與經典液相色譜相比有以下優點：

速度快——通常分析一個樣品在15～30min，有些樣品甚至在5min內即可完成。

分辨率高——可選擇固定相和流動相以達到最佳分離效果。

靈敏度高——紫外技術器可達0.01ng，熒光和電化學技術器可達0.1pg。

柱子可反復使用——用一根色譜柱可分離不同的化合物。

樣品量少，容易回收——樣品經過色譜柱后不被破壞，可以收集單一組分或做制備。

技術服務列表