Collagel® Kit

 Collagel®Kit具有用于創建3D細胞接種的生物I型膠原蛋白凝膠的所有組件（請參見表1）。

 Type I Collagen (3 mg/ml in 0.01 M HCl)

 5X MEM

 Fetal Bovine Serum

 1M Hepes

 0.1 M NaOH in 5X MEM

 一般用途的制備1 MLCOLLAGEL®膠原蛋白凝膠的協議

 1.在1.5 ml離心管中，合并160μl試劑A，80μl試劑B和20μl試劑C。
2.在另一個1.5 ml離心管中，合并700μlCollagel®和40μl試劑D。充分混合后，確保Collagel®/ Reagent D混合物的pH值為7.0 – 7.2。 如果不是，則加入2.5μl試劑D，混合均勻，然后再次測試。 重復直至pH在所需范圍內。
3.合并兩個試管，并用移液器充分混合。
4.此凝膠溶液可用于重懸細胞沉淀或其他成分以進行鋪板。 參見圖2，了解37°C下的凝膠動力學。

 在FLEXCELL®線性組織TRAIN®培養板中植入生物人工細胞水合物（BAT）的協議

 1.根據您選擇的培養基中用于原代培養或連續細胞系的既定方案準備細胞。
2.用0.05％的胰蛋白酶，胰蛋白酶-EDTA，0.05％的細菌膠原酶或其他方法釋放細胞。
3.向細胞添加含血清的培養基，以中和胰蛋白酶或膠原酶。
4.計數細胞并確定所需的細胞數量，對于6孔TissueTrain®培養板的每個孔，在150-200 ulCollagel®膠原蛋白凝膠中約50,000-200,000個細胞。注意：3D凝膠中的細胞接種密度將根據細胞類型而變化。我們建議測試細胞接種密度，以確定適合您的應用和細胞類型的細胞數。
5.用培養基洗滌細胞兩次，以去除胰蛋白酶或膠原酶。
6.將帶有墊片的TissueTrain®板放置在Trough Loader™的頂部，并確保正確放置以實現密封真空。
7.使用Flexcell®FX-5000™張力系統啟動大伸長率（?90 kPa）靜態下拉方案。注意：對于標準Collagel®，建議2小時的膠凝時間。還建議每6秒以大2％的大伸長率緩慢釋放真空，直到達到0％的伸長率。
8.準備Collagel®培養基基質，請參見下表中的示例體積。在1.5毫升試管（未提供）中混合試劑A，B和C。在5.0毫升試管（未提供）中，將試劑D添加到Collagel®中并充分混合（*混合的溶液應變成淺桃紅色）。取出10 µl ReagentD-Collagel®混合物，并涂在pH紙（未提供）上，以確保pH為中性（7.0-7.2是理想的）。注意：如果不是，則添加2.5 µL試劑D，然后再次檢查。重復直至pH在所需范圍內。將試劑A，B，C的混合物添加到Collagel®混合物中，然后通過移液將其充分混合。將所有試劑保持在4°C或在冰上制備。

Thermacol® Kit

 Thermacol®試劑盒具有用于創建3D細胞接種的生物I型膠原蛋白凝膠的所有組件（請參見表1），此外還添加了含端肽的膠原蛋白，這為混合液在低溫（4°C）下提供了更高的穩定性，不同 膠凝后的物理特性，以及快速可控的膠凝動力學。

 一般使用的1毫升THERMOCOL®膠原蛋白凝膠制備協議

 1.在1.5 ml離心管中，合并160μl試劑A，80μl試劑B和20μl試劑C。
2.在另一個1.5 ml離心管中，合并1,630μlCollagel®，70μlThermacol®和40μl試劑D。充分混合后，確保Collagel®/ Reagent D混合物的pH值為7.0 – 7.2。 如果不是，則加入2.5μl試劑D，混合均勻，然后再次測試。 重復直至pH在所需范圍內。
3.合并兩個試管，并用移液器充分混合。
4.此凝膠溶液可用于重懸細胞沉淀或其他成分以進行鋪板。 關于在37°C下的凝膠化動力學，請參見圖2。