產(chǎn)品介紹：　

  KAPA hgDNA定量&QC試劑盒，是基于SYBR Green I染料法優(yōu)化的高質量qPCR檢測試劑盒，包含KAPA SYBR® FAST qPCR Master Mix預先稀釋的一系列DNA標準品，以及針對于人類基因組單拷貝的高度保守區(qū)域的不同位點所設計的引物預混液。最小片段所對應的引物，用于獲得絕對定量的結果，而額外的引物，用于獲得在DNA樣本中可擴增模板量(質量高的核酸片段)的信息。這個試劑盒由此所產(chǎn)生的質量分數(shù)(即Q-ratios)，可以用于預測文庫的產(chǎn)量，或者對于如FFPE DNA這類樣本質量變化很大的樣本的工作流程進行調整。

產(chǎn)品名稱：KAPA 人類基因組DNA定量及QC試劑盒

產(chǎn)品貨號：KK4960

產(chǎn)品特點：

在單次檢測中，同時評估樣本量以及樣本質量

可以將質量分數(shù)(Q-ratios)與測序相關指標相關聯(lián)

高性能的KAPA SYBR FAST qPCR Master Mix

預先稀釋好的DNA標準品以及可以直接使用的引物

多功能、易于自動化的工作流程

產(chǎn)品原理：

一組DNA標準品，使用三對不同引物，用于產(chǎn)生(最多)三組標準曲線。這三對引物的擴增目標，位于某高度保守、單拷貝的人類基因組位點，其大小分別為41 bp, 129 bp以及305 bp。41 bp檢測用于DNA樣品的絕對定量。對于評估DNA質量，使用129 bp和/或305 bp引物預混液生成標準曲線并且檢測樣本。由于低質量的DNA樣本的長片段擴增效率會大幅度降低，相對的DNA質量可以通過41 bp檢測的濃度，對于129 bp或者305 bp檢測的濃度進行均一化，或者在此DNA樣本中可被擴增的物質的量來進行推測。這種通過標準化產(chǎn)生的質量分數(shù)(值介于0和1之間)，可以用于指示DNA的質量，或者在此DNA樣本中可被擴增的物質的量。

產(chǎn)品優(yōu)勢：

對于稀釋后的DNA樣本進行絕對定量

用附加的引物進行定量分析，獲得的Q-ratio用于指示樣本的質量

使用預期：

文庫的轉化率，為在Illumina測序平臺上進行靶向重測序而制備

分別從樣本質量參差的80-100 ng FFPE DNA樣本(橙色)和商用人類基因組DNA(灰色)，使用KAPA LTP文庫構建試劑盒來構建測序文庫。FFPE DNA樣本在用Covaris打斷之前，用KAPA hgDNA定量&QC試劑盒進行檢測，然后按照Q-ratios(DNA質量)沿X軸升序排列。Q-ratios如圖中標注。片段化的DNA(平均大小在180 bp左右)在建庫之前，用Qubit® HS dsDNA (Life Technologies) 進行定量；在連接接頭、形成文庫分子之后，使用基于qPCR的KAPA文庫定量試劑盒進行定量。結果顯示，F(xiàn)FPE樣本的文庫轉化率(Conversion Rate，起始DNA分子轉化成連接有接頭的文庫分子的百分比，%)明顯低于高質量的DNA樣本，使得FFPE樣本的文庫分子多樣性受到限制，并且需要在文庫擴增步驟中采取更多的循環(huán)數(shù)才能得到足夠多的文庫分子進行靶標捕獲，從而使FFPE樣本的文庫的重復率(duplication rate) 更高，靶標覆蓋率(target coverage)更低。

產(chǎn)品名稱：KAPA 人類基因組DNA定量及QC試劑盒

產(chǎn)品貨號：KK4960

產(chǎn)品訂購信息

品牌     貨號             名稱                                   規(guī)格

KAPA  KK4960  KAPA hgDNA定量和質控試劑盒   300反應

關于公司：

Kapa Biosystems位于美國馬薩諸塞州威爾明頓，是一家蛋白質工程專家及基因組學工具供應商，致力于研發(fā)、生產(chǎn)下一代測序（NGS）所需的生物酶及相關試劑，該公司基于直接分子進化平臺開發(fā)的產(chǎn)品已被廣泛用于DNA擴增、測序、基因組學研究、分子診斷等領域。

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